[发明专利]快速鉴别东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的分子生物学方法

权利要求书

1.一种快速鉴别东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的分子生物学方法，包括下述顺序的步骤：

(1)从待测对象中分离提取基因组DNA；

(2)利用两组PCR引物对待测对象的COI基因全序列进行PCR扩增：

所述的两组PCR引物的引物序列分别为：

P1F：5'-AACCGAACGCAAATCA-3'，

P1R：5'-AAAGTGTAGCCCGAGA-3'；

P2F：5'-TCCGCTGGCAGGAAACT-3'，

P2R：5'-GGCGTGGTCGTGGAAAG-3'；

以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，以所述的P1F和P1R为引物对进行PCR，得到片段APCR产物；以所述的P2F和P2R为引物对进行PCR，得到片段B PCR产物；

(3)将扩增良好的片段A PCR产物和片段B PCR产物送生物公司测序后，将片段A和片段B拼接，截去COI基因全序列前后多余的碱基，即得到待测对象的COI基因全序列；

(4)依据下表所列的核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别：

东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的核苷酸序列特征变异位点

表中位点的序号以COI基因全序列位置为基准；表中字母“M”为东白眉长臂猿的简写；字母“J”为北白颊长臂猿的简写；相关的简并碱基代码为R＝A/G，Y＝C/T。

2.根据权利要求1所述的快速鉴别方法，其特征在于：步骤(2)所述的PCR，其反应体系为50μl，其中模板DNA 25ng，1×PCR buffer，2.5mM Mgcl₂，1mM dNTP，2μg/μl BSA，正、反向引物各2pM，TaqDNA聚合酶1个单位；具体操作为，加去离子水调至终体积50μl，以石蜡油封盖体系；PCR反应条件如下：95℃预变性3分钟，94℃变性1分钟，50℃退火1分钟，72℃延伸1分钟；35个循环后，72℃再延伸10分钟。

3.根据权利要求1所述的快速鉴别方法，其特征在于：所述的待测对象包括动物的静脉血、粪便、毛发或尿液样品。