[发明专利]一种分离尿液中外泌体的方法

权利要求书

1.一种分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，包括步骤：

S1、收集尿液，离心，保留上清液（SN1）；

S2、使用二硫苏糖醇（DTT）处理底部沉淀；

S3、处理后的混合液经离心获得上清（SN2），与第一次得到的上清SN1混合；

S4、将特定体积的商业化外泌体沉淀试剂加入到总的上清液中（SN1+SN2），混匀后在4℃孵育至少12个小时；

S5、将上清与外泌体沉淀试剂混合液离心，在管底得到可见的外泌体沉淀；

S6、加入磷酸盐缓冲液重悬外泌体沉淀。

2.根据权利要求1 所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述步骤S1包括：

1) 收集尿液的过程中需要加入蛋白抑酶混合剂（Protease Inhibitor Cocktail）；

2）在37℃条件下，17,000 × g 离心尿液10分钟。

3.根据权利要求1所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述步骤S2包括：

1）使用DTT处理底部沉淀时需要加入分离溶液；

2）使用DTT处理底部沉淀的终浓度为200mg/mL；

3）使用DTT处理底部沉淀时需要在37℃条件下孵育10分钟。

4.根据权利要求3 所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述分离溶液的组分为：250mM蔗糖，10mM三乙醇胺，一个PIC药片（罗氏），pH值为7.6。

5.根据权利要求1 所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述步骤S3的离心条件为在37℃条件下，17,000 × g 离心10分钟。

6.根据权利要求1 所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述步骤S4包括：

1）商业化外泌体沉淀试剂优选为，ExoQuick-TC；

2）加入ExoQuick的优选条件为每10mL上清液中加入3.3mL。

7.根据权利要求1 所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述步骤S5的离心条件为在4℃条件下10,000 × g离心30分钟。

8.根据权利要求1 所述的分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述步骤S6中磷酸盐缓冲液的组分为：140mM NaCl、2.7mM KCl、10mM Na₂HPO₄、1.8mM KH₂PO₄，pH 值为7.4 。

9.一种分离尿液中外泌体的试剂盒，其特征在于，包括：商业化的外泌体沉淀试剂，优选地，ExoQuick-TC，DTT、蛋白抑酶混合剂、分离溶液及磷酸盐缓冲液。