[发明专利]过敏性鼻炎动物模型的构建方法

说明书

技术领域

本专利涉及新药研发、药效评价技术和实验动物技术领域，特别的，涉及一种天然蛋白过敏性鼻炎小鼠模型的构建。

背景技术

过敏性鼻炎即变应性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)，是指特应性个体接触变应原后，主要由IgE介导的介质(主要是组胺)释放，并有多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻黏膜非感染性炎性疾病。其发生的必要条件有3个：特异性抗原即引起机体免疫反应的物质；特应性个体，即所谓过敏体质的个体；特异性抗原与特应型个体二者相遇。过敏性鼻炎是一个全球性健康问题，可引起睡眠紊乱、食欲减退、全身乏力、疲劳、情绪失调、注意力减退和学习障碍等症状，并继发多种呼吸系统疾病，严重者可导致劳动力丧失。

根据2008年版“过敏性鼻炎及其对哮喘的影响”(Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma，ARIA)的数据，保守估计全球的AR患者超过5亿，其中，欧洲和北美超过1亿，亚太地区超过1.5亿，印巴及周边地区超过1亿，中南美洲超过7.5千万，非洲超过3千万，其他国家超过1亿。AR在患病率较低的国家和地区呈上升趋势，而在患病率较高地区较平稳，甚至下降。根据中心城市自报患病率，保守估计我国AR实际患者应在5千万以上。

过敏性鼻炎的发病率高，发病机制复杂，因此建立一种既能反应过敏性鼻炎典型症状，又能反映其病理生理改变的动物模型，有助于对其发病机制的阐述以及治疗性药物的开发。目前对AR动物模型也已有一定的研究，现阶段常用的AR动物模型动物有豚鼠、BALB/c小鼠、C57BL/6小鼠、Wistar大鼠、新西兰兔等动物，其中豚鼠是最早用来建立AR模型的动物，虽然豚鼠属于易致敏动物，但是其过敏性模型的制备需要消耗大量的变应原；对变应原的选择方面目前还主要是甲苯-2,4二异氰酸酯(TDI)、OVA、艾蒿花粉、豚草花粉、雪松花粉、真菌变应原、蛔虫变应原、蟑螂变应原及血吸虫蛋白抗原等(李萌、魏肖云等人，变应性鼻炎动物模型的研究现状)、(冯纬纭、谢芳，变应性鼻炎动物模型造模综述)、(赵宇、C.A ndrew van H asse lt、吴港生等人，卵白蛋白经鼻致敏建立变应性鼻炎动物模型)。然而，对于最重要的变应原之一——尘螨，还没有成功建立AR动物模型的报道。

尘螨是最重要的过敏原之一，普遍存在于室内外，是一种普通存在的生物，肉眼一般看不见。1964年荷兰医学生物学家Voorhorst和Spieksma证明尘螨是屋尘中最强烈的过敏原，继后70-80年代，西欧、美国、日本等相机研究报道，肯定尘螨是一种分布广泛、最为重要 的室内过敏原。国际上一致认为在不同的地理位置和生活环境，优势螨种分布也有不同，但是在全世界范围内，居室内最优势的螨是粉尘螨和户尘螨。我国男性占前4位的过敏原依次为粉尘螨、户尘螨、艾蒿、德国小蠊，女性依次为粉尘螨、户尘螨、艾蒿和藜。

由于不同变应原的免疫原性等性质的差异，不同动物致敏后的AR症状不尽相同，因此采用不同的变应原针对不同的模型动物构建AR模型的方法并不具有统一性。此外，AR动物模型一般包括致敏和激发两个阶段，但由于变应原的不同，致敏和激发的最优条件往往差异很大。其中致敏次数、致敏剂量、激发剂量、激发方式对小鼠AR模型的成模率和稳定性有较大的影响，本专利期望通过对上述条件的系统优化，找到一种构建尘螨变应原蛋白提取物为变应原的小鼠AR模型的有效方法。

发明内容

本发明的技术方案提供一种过敏性鼻炎动物模型，它利用尘螨变应原蛋白提取物作为变应原，以腹腔注射致敏，滴鼻激发的方式，建立小鼠的过敏性鼻炎模型。

本发明首先提供一种过敏性鼻炎(AR)动物模型的构建方法，包括致敏步骤和激发步骤，所述方法以尘螨变应原蛋白提取物进行致敏和激发，所述动物为BALB/c小鼠。

优选的，所述尘螨变应原蛋白提取物用于致敏步骤时，还包含AL(OH)₃佐剂。

优选的，过敏性鼻炎(AR)动物模型的构建方法，包括下列步骤：

1.选取BALB/c小鼠，适应性饲养；

2.致敏步骤：进行腹腔注射尘螨变应原蛋白提取物及AL(OH)₃佐剂，致敏阶段尘螨变应原蛋白提取物剂量为10μg/只～225μg/只；

3.激发步骤：以尘螨变应原蛋白提取物滴鼻激发，为连续7天、每天1次，激发阶段尘螨变应原蛋白提取物剂量是致敏阶段剂量的2倍。

作为优选，致敏阶段进行4次腹腔注射，每次间隔7天。

所述尘螨变应原是粉尘螨变应原或户尘螨变应原。