[发明专利]一种调节人结肠肿瘤细胞的表达载体、制备方法及其应用

说明书

本发明调节人结肠肿瘤细胞的表达载体、制备方法及其应用。一种调节人结肠肿瘤细胞的表达载体，它是由C10orf10基因和Pcdna3.1‑HisA载体构建而成。制备方法为(1)获得cDNA(2)将上述cDNA连接到TOPO PCR Blunt载体，转化感受态大肠杆菌，在含青霉素培养LB板中培养，挑取阳性克隆培养，经测序选择正确克隆；(3)C10orf10表达载体的构建。本发明构建了人C10orf10基因过表达载体并公开了它的用途。本发明提供的C10orf10基因过表达载体转染入人结肠癌细胞后能够特异性促进人C10orf10基因的表达，导致肿瘤细胞衰老并抑制肿瘤细胞的增殖。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体地，本发明涉及一种人类抑癌基因C10orf10(Chromosome 10Open Reading Frame 10)/DEPP(Decidual Protein Induced ByProgesterone)在结肠癌治疗药物中的应用。

背景技术

结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处。发病率占胃肠道肿瘤的第3位。结肠癌起病隐匿，早期常无明显的临床表现，病情发展较慢，出现明显的症状时大多已到了中晚期，死亡率仅次于肺癌和肝癌，占我国恶性肿瘤第三位。因此，结肠癌治疗成为肿瘤研究的重要方向。结肠癌的发生、发展受多种因素的影响,其中，已发现部分癌基因(如Bcl-2、c-myc、set、survivin等)和抑癌基因(如APC、DCC、nm23、p53、PP2A、PTEN等)与结直肠癌的发生、发展有密切关系，但是至今还有许多与人结直肠癌发病相关的癌基因尚未发现。对这些基因的发现与研究有助于为结肠癌的基因治疗、愈后及抗癌药物的研发提供新的方向。

C10orf10最初被确定为禁食和孕酮诱导表达的基因，其表达的蛋白为DEPP蛋白。DEPP蛋白通过调节子宫内膜基质细胞分泌孕激素和调节脂肪组织和肝脏内的胰岛素水平，诱发恶性神经胶质瘤细胞低氧应激的反应。但是目前，DEPP表达增加抑制肿瘤生长尚未被证明，其在结肠癌中的作用机制尚不完全清楚，其功能和表达变化的临床意义尚未有报道。因此，分析DEPP与结肠癌发生发展的关系，探索针对DEPP途径的结肠癌诊断和治疗策略至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的抑癌基因C10orf10表达载体，并证明所述表达载体可在制备治疗结直肠癌的药物中应用。

人C10orf10基因已在GenBank注册，注册号NM_007021.3，定位于10q11.21，全长2060bp，编码212个氨基酸，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所述。

一种调节人结肠肿瘤细胞的表达载体，它是由C10orf10基因和Pcdna3.1-HisA载体构建而成。

所述的调节人结肠肿瘤细胞的表达载体应用于离体癌细胞，所述的表达载体抑制人结肠肿瘤细胞的增殖。

所述的调节人结肠肿瘤细胞的表达载体应用于离体癌细胞，所述的表达载体加速人结肠肿瘤细胞的衰老。

本发明构建了一种治疗结肠癌的表达载体，是由C10orf10基因和Pcdna3.1-HisA质粒构建而成，制备方法如下：

(1)获得cDNA：全长C10orf10基因的CDS(蛋白质编码区，SEQ ID NO.2)采用RT-PCR法从结肠癌HCT116的总RNA中获得，然后进行扩增，扩增所用引物为

C10orf10-cF：(SEQ ID NO.3)atgaggtccc ggcttctgct c

C10orf10-cR：(SEQ ID NO.4)cggtgatcca tgaactctga

(2)将上述cDNA连接到TOPO PCRBlunt载体，转化感受态大肠杆菌，在含青霉素培养LB板中培养，挑取阳性克隆培养，经测序选择正确克隆；