[发明专利]用于检测与氯吡格雷药物抵抗反应相关的基因位点高效分型的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测与氯吡格雷药物抵抗反应相关 的基因位点高效分型的试剂盒。

背景技术

据世界卫生组织报道，心脑血管疾病是世界范围内人口死亡的主要原因，我国目 前现有心梗、脑梗患者超过1000万，而且每年新增患者分别约100万、200万人。心肌梗死是 致死率最高的疾病，而卒中则是成人残疾的首位原因。

抗血小板药物是目前心脑血管病预防和治疗的最主要的药物之一，是药物治疗中 的基础治疗。氯吡格雷（药品名波立维）因其有效的降低心梗和卒中的发病风险和死亡率及 更好的安全性，是目前世界范围内最常使用的抗血小板药物。氯吡格雷是一种新型噻吩吡 啶类衍生物。氯吡格雷作为一种前药，需要在体内被代谢为活性形式才能够发挥其生物药 效活性。氯吡格雷在小肠内被吸收后，受到ABCB1基因编码的质子泵P糖蛋白调控，约有85% 被水解为无活性的羧酸，仅有15%会在肝脏中被细胞色素P450家族的酶通过两步主要氧化 反应代谢为活性形式：首先在CYP2C19,CYP1A2和CYP2B6的催化下，氯吡格雷的噻吩环被打 开氧化为2-羟基-氯吡格雷；继而CYP3A4,CYP2B6,CYP2C19和CYP2C9继续将其催化为活 性产物，这种不稳定的活性形式在血小板上的ADP受体P2Y12经过肝脏时与之形成二硫键结 合，从而不可逆的抑制ADP激活血小板聚集。

在长期的临床实践中发现患者对氯吡格雷的反应性有很大的个体差异，并不是对 所有患者都有足够的保护作用，有相当一部分的患者会对氯吡格雷产生低应答。近两年随 着药物基因组学的发展，发现除年龄、体指、血压、血脂、血糖等常规因素的影响外，基因多 态性是导致氯吡格雷个体疗效差异性的主要原因，其中CYP2C19基因是导致氯吡格雷疗效 下降的最主要代谢基因，其对临床事件的影响力超过上述传统因素的总和。氯吡格雷代谢 不良可造成其抗血小板聚集作用明显降低，并且与患者心血管事件发生率增加直接相关。 2010年，美国食品和药物管理局（FDA）也发布公告，必须在氯吡格雷（波立维）药品标签上注 明警告，建议用药前对患者进行基因检测，经基因检测证实的因CYP2C19基因多态性造成细 胞色素酶（CYP）功能异常者，或其他药物影响CYP2C19活性者，应改变氯吡格雷的服用剂量 或者使用其他抗血小板药。近年来在中国人群中也已经有很多研究发现携带有CYP2C19功 能缺失基因CYP2C19*2（rs4244285，681G﹥A）和CYP2C19*3（rs4986893，636G﹥A）都会使病人 在进行氯吡格雷抗血小板治疗的时候出现高血小板活性状态，导致氯吡格雷的无应答或者 低应答，并且携带功能缺失突变的病人服用氯吡格雷进行抗血小板治疗后更易发生心脑血 管缺血事件。在亚洲南部人群中CYP2C19*2和CYP2C19*3的发生概率明显高于美国、欧洲、亚 洲东部等人群。因此在临床用药过程中，应首先对患者进行CYP2C19*2和CYP2C19*3的基因 分型检测，若有一个或两个基因位点变异，则应改变氯吡格雷的服用剂量或者使用其他抗 血小板药。用药前进行基因分型检测对于临床指导个体化合理安全用药有重要意义。

本发明提供了一种简便、精确地检测CYP2C19*2(rs4244285)和CYP2C19*3 (rs4986893)基因位点的试剂盒，为个体化抗血小板治疗提供依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测与氯吡格雷药物抵抗反应相关的基因位点 高效分型的试剂盒。

本发明提供的用于检测与氯吡格雷药物抵抗反应相关的基因位点高效分型的试 剂盒是基于SequenomMassARRAY分型系统，包含用于扩增位点CYP2C19*2(rs4244285)和 CYP2C19*3(rs4986893)的PCR扩增引物和单碱基延伸引物。

所述基因位点CYP2C19*2(rs4244285)的PCR扩增引物序列如SEQIDNO.1-2 所示；CYP2C19*3(rs4986893)的PCR扩增引物序列如SEQIDNO.3-4所示。所述基因位点 CYP2C19*2(rs4244285)的单碱基延伸引物序列如SEQIDNO.5所示；CYP2C19*3 (rs4986893)的单碱基延伸引物序列如SEQIDNO.6所示。上述引物序列见表1。