[发明专利]一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及沉水植物金鱼藻的组培和快速繁殖 方法，该方法是利用完全无菌和严格的控温措施，实现了沉水植物金鱼藻在实验室大量生 产，并可以推广到生态环境修复。

背景技术

金鱼藻属于金鱼藻科金鱼藻属，在湖泊生态修复工程中作为净水工具种和植被恢 复先锋物种、鱼虾蟹塘养殖过程中作为饵料、避难和产卵场所，以及室内观赏水族养殖过程 中作为布景材料。目前尚缺乏成熟技术，可以大规模扩繁金鱼藻优质工程苗，同时克服该物 种在自然环境中种源有限且污染严重的问题。

发明内容

本发明提供了一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法，该方法是在无菌条件下，采 取控温措施，给予固定光照，培养无菌苗体系，可常年提供大量无菌幼苗。方法易行，操作方 便，产量高。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种金鱼藻组织培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：

A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的可萌发腋芽的金鱼藻茎 段作为外植体，然后用洗涤剂浸泡，无菌水清洗进行预处理；

B、外植体灭菌：

用酒精和植物组织抗菌剂处理外植体，制备无菌外植体；

C、芽诱导：选择0.50mg/L6-BA和1.30mg/LIAA的MS固体培养基，蔗糖质量体积浓度 为3%，pH调至5.8-6.0，固体培养基装于50毫升三角瓶中，每瓶20毫升；固体培养基经过120 ℃灭菌处理20min，冷却后，接入灭菌处理后的1-1.5cm的金鱼藻外植体，于光照培养箱中静 置培养，待幼芽长至1.0-1.5cm进行增殖培养；

D、增殖培养：选择蔗糖质量体积浓度1.5%的1/2MS液体培养基，添加0.5-2.00mg/L 6-BA和0.01-1.00mg/LIAA的激素；液体培养基分装于200毫升三角瓶中，每瓶100毫升，培 养基灭菌方式与芽诱导相同，接入长1.0-1.5cm的幼芽置于光照培养箱中静置，进行增殖培 养；

E、炼苗和移栽：待金鱼藻无菌苗长至4.0cm即可炼苗，打开瓶盖，室温下炼苗1-2d后洗 净培养基，取出试管苗，移栽至自然水体中；

所述的步骤C，D，E均采用无菌环境，光照60-70μE/（m²·s），光照周期为12h/d，室内温 度（25±2）℃。

所述步骤A中，预处理的具体步骤如下：用碱性洗涤剂浸泡30min，再用自来水冲洗 1小时，用蒸馏水反复冲洗4-5次，用无菌水再反复清洗4-5次，置于无菌操作台。

所述步骤B中，在无菌操作台上首先用75%乙醇浸泡15秒，用无菌水冲洗4-5次，再 用5%植物组培抗菌剂PPM进行表面消毒5min，无菌水冲洗4-5次，在无菌滤纸上将水吸干，待 用。

本发明具有以下优点：

目前关于金鱼藻组织培养的技术未见报道，也没有系统的对金鱼藻作出研究。但是金 鱼藻是污染水体中最后坚守的水生植物，水体污染的后期，几乎只剩下金鱼藻，可见金鱼藻 的耐污能力较强，因此获得足够的金鱼藻可以为水环境修复提供源源不断的种苗。该技术 能直接诱导金鱼藻幼芽的生长，不断产生丛生芽，而且在液体环境中才能更好实现金鱼藻 无菌苗的增殖培养。金鱼藻一年四季均可生长，但是冬季生长会变得迟缓，高温也会导致生 长缓慢，利用本发明可以不受季节、温度、地域影响，获得大量的无菌苗。一个为长1.5cm的 外植体经过一个月的培养可以繁殖出3-9cm长的幼苗，30d的增殖系数最高可达到18倍，一 年一个芽理论上可繁殖十亿棵以上幼苗，远远优越于自然水体植物的繁殖速度。以一个芽 30d继代一次，每次的繁殖系数为18计算，预期结果如下表1所示。

表1