[发明专利]一种检测艾滋病治疗药物核苷类逆转录酶抑制剂主要耐药突变位点的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，涉及艾滋病病毒耐药突变位点的检测，尤其涉及一种检 测艾滋病治疗药物核苷类逆转录酶抑制剂主要耐药突变位点的引物及其应用。

背景技术

艾滋病自1981年发现以来，迅速在全世界蔓延，已成为危害人类健康的重大公共卫生问 题。据UNAIDS报道，截至2014年，全球存活的艾滋病病毒感染者和病人约3670万，其中 2014年新发感染200万例。

高效抗逆转录病毒治疗已广泛应用于艾滋病患者的临床治疗，目前约有1560万艾滋病病 毒感染者接受抗逆转录病毒治疗，极大地提高了患者的生存率。然而，抗病毒治疗的人数及 地区的快速扩大也导致艾滋病耐药毒株的传播和流行。我国不同地区抗病毒治疗人群耐药发 生率从3％到56％不等。

对于艾滋病初治患者，抗病毒治疗方案为2种核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)+1种非 核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)或2种NRTIs+1种蛋白酶抑制剂(PIs)，分别以HIV病 毒pol基因上的逆转录酶和蛋白酶为靶标。艾滋病的耐药发生在艾滋病病毒pol基因上，主要 分为NRTIs耐药突变、NNRTIs耐药突变和PIs耐药突变。其中NRTIs药物有齐多夫定、拉 米夫定、扎西他滨等，可诱导产生K65R、M184、T215Y等耐药突变。

病毒耐药是导致治疗失败的主要原因之一，采用经济高效的耐药检测方法，及时了解HIV 治疗患者的耐药性，对于提高艾滋病治疗效果和控制艾滋病疫情有重要意义。

目前临床上广泛使用的耐药检测方法是基于测序的基因型检测，包括直接测序法、克隆 测序分析、连续特异性扩增分析、深度焦磷酸测序等。这些方法虽然操作较为简单，但缺点 明显，如检测时间长、费用高等。

等位基因特异性PCR(ASPCR)是一种快速、准确、低成本的检测单碱基突变的技术。 它通过设计三条引物，其中一条为通用引物，另外两条为特异性平行引物，引物的3’末端分 别与突变位点配对或错配。进行PCR时，模板正确匹配的引物正常扩增，而与模板错误配对 的引物没有扩增产物，从而确定序列的基因型。

发明内容

本发明的目的是使用ASPCR技术，针对主要的NRTIs耐药突变设计特异性引物，提供 一种快速、灵敏、低成本的检测艾滋病治疗药物核苷类逆转录酶抑制剂主要耐药突变位点的 引物及其应用。

本发明采取的技术方案如下：

一种检测艾滋病治疗药物核苷类逆转录酶抑制剂主要耐药突变位点的引物，包括检测 HIV-1病毒pol基因的突变位点M41L、D67N、K65R、K70R、K70E、M184V、M184I、L210W、 T215Y和T215F的ASPCR引物，每个突变位点均包括一对野生型PCR扩增引物及一对突变 型PCR扩增引物，每对野生型PCR扩增引物或突变型PCR扩增引物均包括一条特异性上游 引物和一条通用下游引物；

对于M41L位点，其野生型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.1和 SEQIDNO.21，其突变型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.2和SEQ IDNO.21；

对于D67N位点，其野生型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.3和 SEQIDNO.21，其突变型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.4和SEQ IDNO.21；

对于K65R位点，其野生型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.5和 SEQIDNO.21，其突变型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.6和SEQ IDNO.21；

对于K70R位点，其野生型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.7和 SEQIDNO.21，其突变型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.8和SEQ IDNO.21；

对于K70E位点，其野生型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.9和 SEQIDNO.21，其突变型PCR扩增引物的上游引物和下游引物分别为SEQIDNO.10和SEQ IDNO.21；