[发明专利]一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法

说明书

本发明公开了一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法。将桑黄子实体粉用超声波辅助热水提取出粗多糖，经乙醇沉淀后，用DEAE离子交换层析分离出酸性多糖组分，然后依次用丙烯葡聚糖凝胶S‑100、S‑200和S‑400层析纯化，收集洗脱峰对应的洗脱液，减压浓缩，冷冻真空干燥获得所述产物。本发明多糖PBPP及其方法，纯度均一，对正常细胞的生长无不良影响，对人宫颈癌细胞HELA和人胃癌细胞SGC‑7901的生长均有明显抑制作用，可用于抗癌产品的开发。

技术领域

本发明涉及了一种多糖的制备方法，尤其是涉及了一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法。

背景技术

多糖(polysaccharide)是由10个以上单糖通过糖苷键连接聚合而成的高分子碳水化合物，分别作为结构成分、储藏养分、特殊的活性成分，在自然界广泛分布。天然活性多糖由于其独特的药理作用和较小的毒副作用，展现出广阔的研究和应用前景。

桑黄(Phellinus baumii)是一种具有多种药理作用的真菌子实体，因寄生于桑树而得名。中医认为桑黄能利五脏、软坚、排毒、止血等，现代医药学研究发现桑黄具有抗癌、抗炎症、抗氧化、降血糖、免疫调节、抗血管生成、护肝等多种药理作用，但其药用机理尚不清楚，这阻碍了其药用价值的进一步提高。分离纯化桑黄抗癌活性成分，对于推进桑黄药用新产品开发及其价值提升等，均具有积极意义。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，采用回流提取、DEAE-Sepharose离子交换层析柱分离和Sephacryl S-100、S-200、S-400层析柱纯化制备获得桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

1)选取生长于桑树上的桑黄子实体，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，高速粉碎机粉碎后过80-100目筛，得到桑黄子实体粉；

2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖。

3)将粗多糖用乙醇进行沉淀。

4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离，得到酸性多糖组分。

5)依次通过Sephacryl S-100层析柱、Sephacryl S-200层析柱和Sephacryl S-400层析柱纯化洗脱后，收集洗脱峰的洗脱液，得到多糖组分取名为PBPP。

所述步骤2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖的具体方法为：

2.1)将烘干的桑黄子实体粉末按料液质量体积比为0.04g/mL加入双蒸水，超声波处理35min后，于100℃下提取4.35h后抽滤，获得残渣和滤液。

2.2)残渣再重复上述步骤2.1)一次，再次获得残渣和滤液。

2.3)合并步骤2.1)和步骤2.2)得到的滤液，在45℃下减压浓缩至原体积的1/4，得到从桑黄子实体中提取出粗多糖液。

所述步骤3)用乙醇进行沉淀的具体方法为：往粗多糖液中加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇质量浓度达到80％，置4℃冰箱过夜，10000rpm离心10min，获得乙醇沉淀后的多糖。

所述步骤4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离的具体方法为：将乙醇沉淀后的多糖用双蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm离心10min，取上清液，过0.22μm滤膜，上DEAE-Sepharose离子交换层析柱，用0.1M NaCl溶液以2.5-3.5mL/min流速洗脱，洗脱时采用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩，-80℃下真空冷冻干燥，得到酸性多糖组分。