[发明专利]与岩沙海葵毒素特异性结合的高亲和力适配体及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，提供了一条与岩沙海葵毒素特异性结合的高亲和力适配体，具有如下所示的通式：5′‑ACCGACCGTGCTGGACTCA‑N₄₂‑ACTATGAGCGAGCCTGGCG‑3′；其中，N代表碱基A，T，C，G中任一个，N₄₂代表长度为42bp的随机序列。本发明基于改良的磁珠SELEX技术筛选得到一条与岩沙海葵毒素特异性结合的高亲和力适配体。该单链DNA适配体可用于样品中痕量PTX的分离富集，食品中PTX的分析检测，中和或拮抗PTX药物的制备，以及水体中PTX的去除。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一条基于改良的磁珠SELEX技术筛选获得的与岩沙海葵毒素特异性结合的高亲和力适配体，为海产品中岩沙海葵毒素的快速检测、水体中毒素的去除、样品中痕量毒素的分离富集，以及中和或拮抗岩沙海葵毒素毒性药物的制备奠定了基础。

背景技术

岩沙海葵毒素(palytoxin,PTX)是一种从海葵属软珊瑚中分离获得的海洋生物毒素，是迄今为止已知的毒性最强烈的海洋生物毒素之一。PTX常存在于热带和亚热带的水域中，并可通过水生食物链在鱼类或蟹类体内蓄积，人类误食这些染毒的水产品后会引起食物中毒。中毒症状主要表现为呼吸困难、呼吸衰竭、运动失调、四肢无力、消化道广泛出血、休克或死亡等。PTX毒性强烈，作用速度极快，对家兔的半数致死量LD50为25ng/kg，从中毒到死亡的时间仅3～5分钟。PTX中毒没有特效药，临床目前主要是采取催吐、洗胃和活性炭胃内毒素吸附等有限的治疗的手段。随着有害赤潮的不断加剧以及人类对海鲜产品愈发的热衷，加大对海洋生物毒素的监控力度，加强海产品检测新技术的开发，特别是研究建立特异性强、灵敏度高、现场高效快速的岩沙海葵毒素的检测方法，对于进一步完善我国食品卫生检验标准体系，提高食品的卫生质量，保障人们生命安全，具有十分重要的重要意义。

目前对岩沙海葵毒素检测最权威的是小鼠生物法，但这种方法特异性差、灵敏度低，同时涉及伦理道德等问题已不主张使用。高效液相色谱法(HPLC)是毒素检测中运用最为广泛、技术比较完善的一种检测方法，可以和多种仪器联和使用，大大提高了检测的灵敏度和特异性。然而，该方法耗时长、样品前处理繁琐、仪器昂贵等问题而难以普及。免疫分析法特别是酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种灵敏度高、特异性好、可实现现场快速分析的方法，在食品安全、生物毒素检测领域已较为广泛地应用。该技术的核心是制备高灵敏性和高特异性的抗体，但是由于抗体的制备过程复杂，储存条件苛刻，稳定性差等问题很大程度上限制了该技术在PTX检测中的应用。

适配体是一种功能类似于抗体的单链DNA或RNA分子，是通过体外筛选技术SELEX(指数富集性配体系统进化，Systematic Evolution of Ligands byExponentialEnrichment)从寡核酸文库中获得的核苷酸序列。与抗体相比，适配体作为一种新型的分子识别元件具有明显的优越势，例如：不需要免疫动物可体外合成，易于标记和修饰，免疫原性低，稳定性高，组织渗透性强等。这些特性使适配体在分析诊断领域，医药研究领域得到广泛应用。近年来已有学者将适配体应用于海洋生物毒素检测领域，同生物传感器平台结合，研发了许多快速、新颖的检测方法而备受关注。

然而，关于与PTX特异性结合的分子识别探针，与PTX特异性结合的高亲和力适配体，以及该适配体的亲和常数鉴定、优化及应用尚无相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一条与岩沙海葵毒素特异性结合的高亲和力适配体及其应用。本发明的第二目的是提供上述适配体在制备样品中痕量岩沙海葵毒素的分离富集试剂中、在制备岩沙海葵毒素检测试剂或试剂盒中、在制备预防或治疗岩沙海葵毒素中毒药物中，以及在制备去除水体中岩沙海葵毒素制剂中等多方面的应用。

本发明的主要技术方案是：基于改良的磁珠SELEX技术筛选得到一条与岩沙海葵毒素特异性结合的高亲和力适配体。该单链DNA适配体可用于样品中痕量PTX的分离富集，食品中PTX的分析检测，中和或拮抗PTX药物的制备，以及水体中PTX的去除。