[发明专利]一种微量抗原乳化的新方法

说明书

技术领域

发明属于免疫学技术领域，提供了一种微量抗原乳化的新方法，是对现有微量抗原与免疫佐剂乳化方法的改进。

背景技术

诱导高效的免疫反应是大多数基于抗原接种的主动免疫的目的。为提高抗原的免疫效果，通常将抗原与佐剂有效混合，这样的混合物注射到动物后可延长抗原释放时间从而提供持续的抗原刺激，以获得良好的免疫效果。尽管使用的抗原各异，但福氏佐剂一直以来是较常用的免疫佐剂。无论是福氏完全或不完全佐剂，因大量羊毛脂的存在，使其粘度极度增加，当水溶性抗原加入到此类佐剂中时，通常采用注射器反复抽拉法、乳钵研磨法、机械搅拌法等经较长时间作用才能制成油包水的抗原-佐剂混合物。注射器抽拉法比较费时、费力，同时还使部分乳化好抗原滞留于乳化用注射，不适用于珍贵、微量抗原的乳化过程；乳钵研磨法和机械搅拌法因密封问题而造成抗原被外源微生物污染，而造成非特异性免疫反应。因此寻求针对微量抗原乳化方法十分必要。超声波乳化法适合于微量抗原的乳化，其极大地避免了抗原被外源性微生物的污染，但超声波可造成颗粒性抗原的结构改变，进而影响到其免疫原性，因此操作程序需系统摸索进行实现程序化，不适用于微量、珍贵抗原的乳化。

发明内容

本发明提供了一种微量抗原乳化的新方法，用于微量抗原与福氏佐剂等混合而制备油包水型免疫混合物，解决了现有抗原乳化技术存在的不足。

本发明中所涉及的抗原为具有诱导免疫原性的蛋白类物质。

本发明中所涉及的微量指体积范围在0.01~1000微升间。

本发明中所涉及的佐剂通常指福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂，还包括其他能产生油包水型免疫混合物的油性佐剂。

本发明使用的仪器BulletBlender为是一款新颖、快速、高通量、高稳定性的组织细胞破碎仪。其转头以每分钟几千次的频率击打试管，当在样品中加入不同规格的高耐磨性研磨珠时，可对细胞或组织样品进行彻底的破碎和均质。

本发明中所使用的混合容器为1.5-2.0毫升的塑料EP离心管。

本发明所述的一种微量抗原乳化的新方法，包括以下步骤：

将适宜浓度的抗原与等体积的福氏佐剂混合于灭菌的1.5毫升EP管中，加入直径为0.5~2.0mm的无菌钢珠4~8粒，同时用其它EP管进行配平，用封口膜封好管口，启动机器，1500转/分钟，1分钟后取出，置于冰浴中1分钟，如此反复4次，将乳化好的抗原以1000g离心1分钟，混合物不分层即可。

本发明的积极效果在于：本发明将微量组织破碎机应用于微量抗原的乳化，结合不同型号的钢珠，可有效实现多个不同微量抗原的同时乳化，不仅有效解决了上述问题，并完全实现了不同抗原的规模化制备，具有很好的应用潜力。

具体实施方式

为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

实施例1

狂犬病病毒免疫混合物的制备

将1000微克/毫升的灭活狂犬病病毒纯化物0.2毫升与等体积的福氏完全佐剂在1.5毫升EP管混合后，加入直径2mm的钢珠6粒，封好管口，启动机器，1500转/分钟，1分钟后取出，冰浴中1分钟，重复4次，病毒抗原与福氏佐剂在1000g离心1分钟后，混合物未出现分层。

实施例2

牛血清白蛋白免疫混合物的制备

将1毫克的牛血清白蛋白溶于1毫升生理盐水中，取0.1毫升加到1.5毫升EP管中，加入等体积的福氏完全佐剂，加入直径2mm的钢珠4粒，其他步骤按实施例1，乳化好的混合物在离心时没有发现分层。

以上所实施例中使用了颗粒性抗原和蛋白抗原两类，而使用的佐剂均为福氏完全佐剂，由于福氏不完全佐剂的物理性状与福氏完全佐剂相同，因此如选用福氏不完全佐剂也可实现相同的乳化效果。同时本发明中两类抗原的使用，说明本发明可应用于大分子和小分子抗原。