[发明专利]一种制备高纯度没食子儿茶素没食子酸酯GCG的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备高纯度没食子儿茶素没食子酸酯GCG的方法，尤其涉及表型儿茶素异构体化合物的高温转化及其单体化合物的制备、分离和纯化的方法。

背景技术

茶叶中的儿茶素主要为表型儿茶素，即表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表没食子儿茶素EGC、表儿茶素没食子酸酯ECG、表儿茶素EC，它们约占儿茶素总量的60~80%。其中EGCG是绿茶茶多酚中含量最高的物质，也是目前公认的茶叶中最主要的抗氧化成分。然而现有研究已经证实，表型儿茶素的异构体如没食子儿茶素没食子酸酯GCG等（其化学结构如附图1所示）在某些方面表现出较强的生理活性，如抗氧化和清除自由基活性等。

儿茶素单体化合物主要是从茶叶或茶叶提取物中进行提取，常用的分离纯化方法有液液萃取、柱层析、中低压柱色谱、高压制备液相色谱和高速逆流色谱分离等。儿茶素的分离纯化不乏其他方法，也常常采用两种或多种方法联合使用。文献及专利中常见表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表儿茶素没食子酸酯ECG等的分离纯化报道，但制备没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物的方法较少。公开专利CN 1562995A《高纯度茶多酚和单体儿茶素的制备工艺及其装置》，采用柱层析的方法纯化制备单体儿茶素，如没食子儿茶素没食子酸酯GCG，但茶叶中没食子儿茶素没食子酸酯GCG含量较低，该方法提取效率不高。公开专利CN 102120738 A《一种非表型儿茶素单体的制备方法》，以儿茶素单体化合物为原料，经高温加压热转化和凝胶介质分离等过程制备非表型儿茶素。如以表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG为原料，得到纯度99.1%的没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物，但该方法所用原料成本高；同时，在转化过程中加入钠盐或钾盐的碱金属，引入了无机盐等杂质，且采用凝胶分离纯化的方法，所制备的单体化合物纯度较低。

鉴于没食子儿茶素没食子酸酯GCG良好的营养保健和生理药理作用，在茶叶及茶叶相关制品的质量控制、生产工艺的优化及其基础功效学的研究过程中，需要高纯度的没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物。

发明内容

本发明的目的是制备没食子儿茶素没食子酸酯GCG纯度大于99%的高纯单体化合物。本发明研制的高纯度没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物，可用于茶叶及其制品中相关物质含量监测的质量控制，相关物质基础营养、保健、生理、药理学功效的研究，以及相关物质对照品和标准物质的研制等领域。

本发明是通过如下技术方案实现的，其制备流程如附图2所示。

步骤1.茶多酚溶液的配制

步骤1-1.茶多酚样品的筛查

绿茶茶多酚中儿茶素的含量较高，优选绿茶茶多酚。市售绿茶茶多酚中儿茶素（总量）的含量有20%、40%、60%、80%、90%、95%、98%等诸多品种，优选儿茶素（总量）含量较高的品种。市售绿茶茶多酚中咖啡因的含量为0%~50%不等，优选咖啡因含量较低的品种。

步骤1-2.料液的配制

称取步骤1-1优选的一定量的绿茶茶多酚样品，加适量溶剂，搅拌超声溶解，配制一定浓度的料液。溶剂可选择超纯水、甲醇、乙腈、乙醇等或其混合溶液，优选超纯水作为溶剂；料液浓度可以配制100~1000 mg/mL，优选300 mg/mL。

步骤2.料液的高温转化

取适量配制的料液，于适当温度转化一定时间。转化温度可选100~150 ̊C，优选130 ̊C。转化时间可选10~300 min，优选120 min。

步骤3.转化液的快速制备液相色谱分离

步骤3-1.快速制备液相色谱分离

快速制备液相色谱可以选择多种类型的色谱填料，如C18、C8、C4等，优选C18填料。填料粒径可以选择5~100 μm，优选20~40 μm的填料。快速色谱柱的尺寸规格以及填料装填质量可以选择多种，本发明使用装填质量为120 g的填料。

快速制备液相色谱分离中，可以选择多种流动相体系，如水、甲醇、乙腈、乙醇等，或其适当比例的混合液，本发明中采用甲醇-水体系。流动相中可以添加不同种类及不同含量的调节剂，如甲酸、乙酸、磷酸等，或其相应的缓冲盐体系，本发明采用水相中添加0.1%（体积比）的乙酸。