[发明专利]一种稳定性好、准确度高的α-羟丁酸脱氢酶检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及α-羟丁酸脱氢酶检测技术领域，特别涉及一种稳定性好、准确度高的 α-羟丁酸脱氢酶检测试剂。

背景技术

α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)是心肌酶谱中的一种酶，在哺乳动物体内普遍存在，主 要分布在心肌红细胞、白细胞及肾脏等组织或器官中。α-羟丁酸脱氢酶不是一个独立的特 异酶，而是含有H亚基的LD-1和LD-2的总称。α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDH）与LDH关系十分密切， 实际上它是LDH同工酶Ⅰ型，因其对α-酮丁酸亲合力高，所以当以α-酮丁酸作为底物时，所测 LDH的活性特称为α-羟丁酸脱氢酶活性。α-HBDH活性升高常见于急性心肌梗塞、骨骼肌损 伤、急性肝炎、白血病及恶性肿瘤等。

目前用于α-羟基丁酸脱氢酶的检测方法主要有酶学比色法、连续检测法等。比色 法的原理是α-HBDH作用于过量的α-酮丁酸生成α-羟丁酸，则剩余的α-酮丁酸与2，4-二硝基苯肼作用形成α-酮丁酸苯腙，在碱性溶液中呈棕色，其颜色深浅或吸光度与酶活性成反比。 连续监测法的原理是α-HBDH催化α-酮丁酸还原成α-羟丁酸，同时使NADH氧化成NAD，在 340nm监测NADH的氧化速率与该酶活性成正比。该方法简单灵敏，是目前临床检测α-羟丁酸 脱氢酶的主要方法。但市面上的试剂一般存在稳定性不好，准确度不高的问题。因此，本发 明根据这一问题，在连续监测法的基础上建立一种稳定性好、准确度高的检测试剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDH）的试剂。

基本原理：

α-HBDH催化α-酮丁酸还原成α-羟丁酸，同时使NADH氧化成NAD，在340nm监测NADH的氧 化速率与该酶活性成正比:

α-HBDH

2-酮丁酸+NADH+H⁺2-羟丁酸+NAD⁺

本发明是通过以下步骤得到的：

一种稳定性好、准确度高的α-羟丁酸脱氢酶检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂 R1和试剂R2的组成如下：

试剂R1中含有

缓冲液_{·················································}100mmol/L，

BSA_{····················································}1g/L

2-酮丁酸_{···············································}4.4mmol/L，

EMULGEN-707_{············································}0.7ml/L

羟基乙叉二膦酸_{·········································}1ml/L-5ml/L

十八烷基三甲基溴化铵_{···································}0.1g/L-1g/L

烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)_{································}2g/L

抗坏血酸氧化酶_{·········································}1KU/L-5KU/L，

胆红素氧化酶_{···········································}1KU/L-3KU/L，

蔗糖_{···················································}5g/L