[发明专利]11种肠道致病菌核酸多重PCR检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种11种肠道致病菌核酸多重PCR检测试剂盒及其应用，包括有用于扩增如下11种肠道致病菌的引物：霍乱弧菌01群、霍乱弧菌0139群、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠黏附性大肠埃希菌(EAEC)、产毒素大肠埃希菌(ETEC)和大肠埃希菌0157:H7。本发明具有以下优点：本发明所述的试剂盒能够多重检测、灵敏度高且使用快捷方便。此外，本发明采用特异性的引物序列，保证检测结果的可靠性；该检测方法操作简单，省时省力；检测通量大，试剂耗材成本低；对检测平台和人工技术水平要求低，能够在常规检测中广泛推广。

技术领域

本发明属于基因检测领域，涉及一种利用通用引物介导的多重PCR扩增方法检测11种肠道致病菌核酸的试剂盒及其应用。

背景技术

腹泻是夏秋季节的常见病、多发病，危害严重，发病的原因复杂，易感人群广泛，其主要病原体有：细菌、病毒、生物因素等，而细菌性感染又是腹泻最常见的病因。另外，食品安全国家标准(GB29921-2013)中规定了食品中致病菌限量要求。因此肠道致病菌是临床诊断及食品安全检验的重要检测项目。

肠道致病菌主要有致泻性大肠杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌等。

致泻大肠埃希菌已成为第三世界国家中导致腹泻的主要病原菌。致泻性大肠杆菌根据发病机制、临床特征、流行病学特征、O抗原血清型及细菌的毒力测定可将致泻性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、侵袭性大肠杆菌(EIEC)、出血性大肠杆菌(EHEC)和肠集聚粘附性大肠杆菌(EAEC)。

EPEC是婴幼儿流行性腹泻的重要病原菌，严重者可致死，在医院中常引起暴发流行。该菌较大儿童和成人感染少见。可引起夏、秋季流行腹泻，也可引起冬季腹泻。ETEC主要通过污染的食物和水传播，是发展中国家5岁以下婴幼儿腹泻和发达国家旅行者腹泻的主要病原菌，可能与卫生条件、生活水平有关。EIEC是在表型、致病性和遗传上与志贺菌非常相似的细菌，主要侵犯较大儿童和成人。所致疾病与菌痢类似，临床表现有发热、腹痛、腹泻、脓血便及里急后重等症状。腹泻可发生在每个季节，但以夏秋季发病率较高，污染的水、食物是重要的传染源。EHEC可感染各年龄组人群，其中以婴幼儿和老人较易感，发达国家多见，污染的牛肉和奶制品可能是重要的传染源。EHEC的重要特征是产生Vero细胞毒素(Vero-toxin，VT)或称志贺样毒素(Shiga-like toxin，SLT)，故又称产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga Toxin-producing E.coli，STEC)，或产Vero毒素大肠埃希菌(Vero-toxigenicE.coli，VTEC)为出血性结肠炎(hemorhagic colitis，HC)和溶血性尿毒综合征(hemolyticuremic syndrome，HUS)的病原体。1982年首先在美国发现，以后在世界各地有散发或地方小流行。以O157:H7血清型为最多见。EAEC的特点是能在细胞表面自动聚集，形成砖状排列，曾名肠粘附性大肠埃希菌，本菌能引起婴儿持续性腹泻、脱水，偶有血便。此菌与临床上小儿顽固性腹泻有关，腹泻症状可持续2周或2周以上，并且能导致儿童营养不良。

霍乱弧菌(Vibrio cholerae)是革兰氏阴性菌，菌体短小呈逗点状，有单鞭毛、菌毛，部分有荚膜。共分为139个血清群，其中O1群和O139群可引起霍乱。霍乱弧菌所致的霍乱，为烈性肠道传染病，曾在世界上发生过几次大流行，至今仍未平息，因此，霍乱被列为国境检疫的传染病。

沙门氏菌属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，已发现的近一千种。按其抗原成分，沙门氏菌可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组。其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首，我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。