[发明专利]一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，通过在链霉菌接种至发酵培养基中进行发酵培养24h后,加入底物FS45并分批加入非极性大孔吸附树脂，而后将抗生素NVP018中间体从树脂中解吸出来并浓缩，之后采用硅胶柱层析法进行分离纯化，其中所采用的洗脱液为二氯甲烷‑甲醇，并进行梯度洗脱。通过本发明的分离纯化方法，可分离得到纯度达92%以上的HS457，且其纯度在85%以上的收率可达70%，HS457的总回收率可达93%；同时采用该方法还可将HS496分离纯化，得到纯度最高达95%以上的HS496，其纯度在85%以上的收率可达70%，总回收率可达95%，且通过本发明的方法还可得到收率为50%的固体粉末状的HS496。

技术领域

本发明适用于生物制药和生物化工领域，尤其涉及一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法。

背景技术

免疫抑制剂是一类具有免疫抑制作用的药物，临床主要用于器官移植的排斥反应和自身免疫反应性疾病。目前临床上使用的有环孢菌素A(cyclosporin A,CoA)、肾上腺皮质激素等。这些药物缺乏选择性和特异性，长期使用会降低机体抵抗力而诱发感染或增加肿瘤发生的机率。因此，开发新型免疫抑制剂具有良好的临床前景。

NVP018(式1)是链霉菌产生的一种新型大环内酯类抗生素,用于治疗乙型肝炎和丙型肝炎病毒，目前正在临床试验阶段。与传统的的免疫抑制药物相比,NVP018具有独特的作用机理,不仅能阻断细胞周期G1阶段的T细胞增殖,而且能在不影响B细胞抗体合成的情况下,阻断B细胞增殖。而HS457(式2)和HS496(式3)均是合成NVP018的中间产物。

目前HS457的分离纯化，已知有使用硅胶柱层析，洗脱溶剂为乙酸乙酯-甲醇，此方法中纯度可达到85％以上的HS457收率很低；使用丙酮及环己烷为洗脱溶剂，溶剂使用量大，成本高，总回收率可达到87％，纯度达到80％以上组分的收率仅有29.0％，目前无产业化的分离纯化报道。

而关于HS496的分离纯化方法，目前无报道。

发明内容

本发明的目的是克服了现有技术的不足，提供一种收率高、成本低的抗生素NVP018中间体的分离纯化方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，包括如下步骤：

1)在链霉菌接种至发酵培养基中进行发酵培养24h后，加入底物FS45并分批加入非极性大孔吸附树脂，底物终浓度控制在1.5～2.5mM/L，待发酵结束后，将所述树脂从发酵液中分离；

2)采用pH为2.0～3.0的酸性溶液对所述树脂进行冲洗过滤，去除杂质，而后用等质量的乙腈溶液对所述树脂进行多次洗脱，合并洗脱液并进行浓缩得到第一浓缩液；

3)调节所述第一浓缩液的pH至5.5～6.5，采用等体积的乙酸乙酯对所述第一浓缩液进行萃取、过滤，合并萃取液，减压浓缩得第二浓缩液；

4)硅胶柱层析纯化：

41)将所述第二浓缩液经环己烷处理分层，下层料液通过二氯甲烷溶解，得到上柱样品；

42)将硅胶通过二氯甲烷浸泡过夜后，匀浆湿法装柱，上样后，采用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，合并洗脱液并浓缩，HPLC检测跟踪，分别收集NVP018中间体HS457、HS496的粗品；

其中，所述的FS45结构式为：

所述的NVP018的结构式为：

所述HS457的结构式为：