[发明专利]一种快速检测禽病病毒的检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种快速检测禽病病毒的检测试剂盒及其检测方法，属于光谱学和分子诊断领域。本发明采用盐酸羟胺络合法制备的银溶胶作为拉曼增强试剂，银溶胶以一定比例与待测物品混合均匀后，滴在石英片上，待自然风干后，使用SmartRaman Ocean5pro便携式拉曼光谱仪进行拉曼检测，所获得的拉曼光谱通过主成分分析和线性判别分析后，实现对目标病原体的定性的检测。所述检测试剂盒操作简便、灵敏度高，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于光谱学和分子诊断领域，特别涉及一种快速检测禽病病毒的检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)，俗称亚洲鸡瘟，可引起鸡群腹泻、呼吸困难及神经症状。禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)包括多个亚型，其中H5亚型禽流感病毒能够引起禽群大量发病和死亡，被世界动物卫生组织列为A类传染病，受到高度重视。积极监测和控制新城疫病毒和禽流感病毒在禽群中的传播，不仅能够减少养殖业的损失，还能在很大程度上降低禽流感病毒从禽群传播给人的风险，有重要的公共卫生安全意义。

目前实验室检测手段主要有病原学检测、病原血清学检测、免疫分析方法和分子生物学检测方法。病毒的分离鉴定是确诊本病最确切、最具公信力的方法，但是实验操作步骤较为冗杂，需时较；免疫分析方法中酶联免疫吸附试验技术，即ELISA，是目前抗原抗体检测领域中，应用最为广泛的免疫学检测方法，具有较高的特异性和敏感性，但是价格较为昂贵；荧光定量RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)技术具有高度的敏感性和特异性，并且可大大缩短对病毒的检出时间，克服了常规血清学诊断方法中非特异性因素的干扰及敏感性问题，为早期快速诊断病毒提供了敏感、快速、实用的检测方法，但是步骤较为复杂，需要提供相应的实验室设备。因此亟待建立一种操作简单，快速，灵敏，无损的高通量的检测方法。

表面增强拉曼光谱散射(Surface Enhanced Raman Scattering,SERS)是指当某些分子吸附到具有纳米粗超度的贵金属表面时，在这些粗超得到的拉曼散射信号就会别增强上百万倍，甚至更高。由此得到的光谱被称为“表面增强拉曼光谱”。相比其他光谱而言，如荧光光谱，红外光谱等，表面增强拉曼光谱具有灵敏度高、谱带窄、抗光漂白、不受水的干扰等特点，并且能够实现快速、实时、无损检测，因此非常适用于生物医学的研究。

发明内容

为克服现有的检测技术需要昂贵的仪器配备专业技术人员的问题，本发明的首要目的在于提供一种快速检测禽病病毒的检测试剂盒。所述的检测试剂盒采用表面增强拉曼光谱技术，提供有一种操作简便、灵敏度高的检测病毒的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供上述试剂盒的检测方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种快速检测禽病病毒的检测试剂盒，包括金属溶胶液，石英片和拉曼光谱仪。

所述的金属溶胶液为金溶胶液或银溶胶液。

所述的银溶胶的制备方法如下：常温下将2.5mL 10^-2mol/L AgNO₃加入到75mL蒸馏水中，加入5mL of 10^-2mol/L巯基乙酸；搅拌10min后滴入2.5mL10^-2mol/L NaI，搅拌20min后，得到浅绿色的AgI溶胶，加入20mg NaBH₄还原，继续搅拌约10min，生成黄褐色银溶胶，得到的是形状均一的球形粒子，平均粒径约35nm，浓度约为120μg/mL。

所述的石英片为波数范围是700-2000cm^-1无明显拉曼峰的基底石英片；

所述的石英片亦可有玻璃片代替。

所述的拉曼光谱仪为SmartRaman Ocean5pro便携式拉曼光谱仪。