[发明专利]一种抗巨细胞病毒人源化抗体药物

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗巨细胞病毒人源化抗体药物。

背景技术

人巨细胞病毒（humancytomegalovirus,HCMV）是一种广泛传播的机会性潜伏感 染病原体，在发展中国家如中国，成人感染率在90%以上，潜伏感染的HCMV终身存在,人体 内难以被清除，在免疫低下的状况下（如肿瘤、器官移植）容易再激活并引起严重的损伤。 HCMV感染是新生儿致畸的首要病毒病因。目前对HCMV既无清空潜伏感染的措施，亦无有效 的预防母婴垂直传播的手段。

完全人源化治疗性抗体避免了鼠源单抗可能导致的人抗鼠抗体反应（HAMA），在临 床治疗中可望发挥重要的作用。因为其具有高亲和力和特异性，能够在复杂的混合物中识 别微量的抗原并中和抗原。恒定区Fc区还可以激发抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用 （ADCC）和补体依赖的细胞毒性作用（CDC），有效地清除靶细胞。

治疗性抗体药物已经成为目前生物技术药物中品种最多、销售额最大的类型，在 非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、结直肠癌等肿瘤和哮喘、银屑病、类风湿性关节炎等自身免疫病 的治疗中已经发挥了重要的作用，但用于病毒治疗的报道较少，主要有抗呼吸道合胞病毒 的帕利珠单抗（Synagis）。发展完全人源化的、高效的、稳定性好的、特异性或广谱性的抗 病毒治疗性抗体是控制新发和重大病毒性传染病、保障人类健康的迫切需求，也是历史交 给我们的迫切任务。近年随着抗体工程技术的进步，完成这一任务正成为现实。

目前，国内外的单抗药物主要应用于治疗肿瘤、防治器官移植排斥等方面。美国 Genentech公司研发的人源化单克隆抗体赫赛汀（herceptin）是第一个针对HER-2阳性乳腺 癌的、以癌基因为靶的治疗药物，对转移性乳腺癌有明显疗效。中国第四军医大学细胞工程 中心和华神集团共同研发的利卡汀（碘美妥昔单抗注射液）是全球第一个批准上市的用于 治疗中晚期原发性肝细胞肝癌的单克隆抗体。中国疾病预防控制中心梁米芳等在利用scFv 等抗体库筛选抗病毒抗体方面开展了卓有成效的工作。但总的来看，国内外关于抗病毒治 疗性抗体，尤其是关键技术及应用方面的报道相对较少。发展抗病毒治疗性抗体研发的关 键技术并对严重威胁国人健康的HCMV病毒开展人源抗体筛选、研制，契合国家战略规划，既 是保障人民健康的迫切需求，也是发展生物高新技术的重大机遇。

发明内容

本发明提供了一种抗巨细胞病毒人源化抗体药物，它通过对人源化抗体Fc区的 定点突变和分子重构，增强其生物学功能，结合酵母表面展示技术，构建新型人源化抗体 库；建立并改进EB病毒（EBV）感染IgG+记忆性B细胞使其永生化、从恢复期病人血细胞中筛 选针对特定病毒的人源化单克隆抗体的技术平台；构建具有自主知识产权的针对HCMV的 高效治疗性抗体，该抗体可以高效特异的在体外及细胞内针对HCMV的抗体进行筛选。

本发明采用了以下技术方案：一种抗巨细胞病毒人源化抗体药物，其特征是它包括对 Fc的改造，提高Tm、T1/2，增强ADCC、CDC；噬菌体和酵母表面展示抗体库的构建；通过 CPG2006/IL-2提高EBV促IgG⁺记忆性B细胞永生化效率，所述的对Fc的改造，提高Tm、T1/2， 增强ADCC、CDC为恒定区Fc区还可以激发抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）和补 体依赖的细胞毒性作用（CDC），有效地清除靶细胞，所述的噬菌体和酵母表面展示抗体库的 构建过程为能够将两种性质完全不同的外源多肽或蛋白质，分别与T4衣壳表面上的外壳蛋 白SOC（9ku）和HOC（40ku）融合而直接展示于T4噬菌体的表面，因此它表达的蛋白不需要 复杂的蛋白纯化，避免了因纯化而引起的蛋白质变性和丢失，T4噬菌体是在宿主细胞内装 配，不需通过分泌途径，因而可展示各种大小的多肽或蛋白质，很少受到限制，所述的通过 CPG2006/IL-2提高EBV促IgG⁺记忆性B细胞永生化效率为采用EBV中国株感染B细胞,提高 EBV永生化B细胞的效率。