[发明专利]抗羊IgMμ链单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途

说明书

本发明公开了抗羊IgMμ链单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途。本发明以分泌型IgM蛋白为靶蛋白，克隆获得IgMμ链基因的完整开放阅读框，亚克隆至原核表达载体，利用镍柱纯化重组蛋白，并对6‑8周龄的雌性BALB/c小鼠进行免疫，当抗体滴度在1∶10000以上时，对免疫小鼠脾细胞的单细胞悬液与对数生长期的骨髓瘤细胞进行融合，筛选获得分泌抗羊IgMμ链的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；向6‑8周龄的经产BALB/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，注射7天左右收集腹水，protein G/A琼脂糖珠纯化腹水，获得纯度较高的抗羊IgMμ链的单克隆抗体。本发明提供的单克隆抗体效价高，可用于羊IgM免疫球蛋白的检测，并且有望实现对多种羊病的早期筛查与监测，具有广泛的应用范围和社会需求。

技术领域

本发明涉及一种抗羊IgMμ链单克隆抗体，还涉及分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途，属于生物技术领域。

背景技术

IgM是免疫球蛋白之一，分泌型IgM为五聚体，是分子量最大的Ig(约900KD)，主要存在于血液中，占血清免疫球蛋白总量的5％～10％。IgM是抗原初次刺激机体后体液免疫应答中最早出现的抗体，是机体抗感染的“先锋部队”；具有很强的细胞毒活性和细胞溶解活性，是抗血管内感染的第一线抗体，IgM抗体一般为保护性抗体，对防止菌血症起主要作用。

在生物进化中，IgM也是出现最早的Ig。在胚胎发育晚期，胎儿就开始具有产生IgM的能力，但是IgM不能通过胎盘。一旦发生感染，机体就快速产生IgM，但持续时间不长，IgM的半衰期短，仅5.1天，而且在感染的早期即已产生。此外，由于IgM在结合补体和活化补体后可通过补体活化片段发挥调理吞噬的作用的能力均较IgG强。因此，血清中检出特异性IgM抗体水平标志着机体近期发生了感染，对某些传染病的早期诊断具有较高的临床价值。

随着科技的发展，流通方式日趋走向多元化和频繁化，造成多种传染病跨地区、跨国界传播，对卫生安全带来了更大的危害。因此，对某些传染病，尤其是潜伏期较长的传染病而言，早期诊断具有重要的防治价值。

重链μ链是IgM分子所特有，抗IgMμ链单克隆抗体具有高效、特异性结合IgM的特性，在体外诊断试剂领域具有非常广泛的应用。市场上不易购买到不同物种的IgMμ链。在制备其单克隆抗体时，一般采用SDS-PAGE切胶获取免疫用μ链，方法繁琐，回收率不高。本实验利用原核表达系统大量表达制备羊IgMμ链，以镍琼脂糖亲和层析和阳离子交换层析纯化的重组蛋白免疫动物，获得分泌抗羊IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞系。

发明内容

本发明的目的之一是提供一株能够稳定分泌抗羊型IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的目的之二是提供由上述杂交瘤细胞株分泌产生的抗羊IgMμ链的单克隆抗体。

本发明的目的之三是提供所述杂交瘤细胞株以及单克隆抗体在制备诊断或检测羊IgM免疫球蛋白及其抗体试剂中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明以分泌型IgM蛋白为靶蛋白，克隆获得IgMμ链基因的完整开放阅读框，并将其亚克隆至原核表达载体，利用镍柱纯化重组蛋白，并对6-8周龄的雌性BALB/c小鼠进行免疫，当抗体滴度在1∶10000以上时，对免疫小鼠脾细胞的单细胞悬液与对数生长期的骨髓瘤细胞进行融合，筛选获得分泌抗羊IgMμ链的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；向6-8周龄的经产BALB/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，注射7天左右收集腹水，protein G/A琼脂糖珠纯化腹水，获得纯度较高的抗羊IgMμ链的单克隆抗体。

本发明的一株能够稳定分泌抗羊型IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为5D1，分类命名为小鼠骨髓瘤细胞与脾细胞杂交瘤细胞，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其菌种保藏编号为:CGMCC No.11283，保藏时间为2015年10月12日。