[发明专利]一种磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法

权利要求书

1.一种磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将含磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶的样本与S-腺苷-L-甲硫氨酸和甲基受体接触以 形成S-腺苷-L-同型半胱氨酸和甲基受体的甲基化产物，

(2)通过将所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸与S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶相接触以生 成高半胱氨酸和腺苷，采用光度计评估所述腺苷的产生速率以检测所述样本中磷脂酰乙醇 胺N-甲基转移酶的酶活力。

2.根据权利要求1所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，所 述甲基受体为磷脂酰乙醇胺类化合物；优选地，所述磷脂酰乙醇胺类化合物为磷脂酰乙醇 胺或磷脂酰N-单甲基乙醇胺；最优选为磷脂酰乙醇胺。

3.根据权利要求2所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，所 述方法包括：

(1)将所述样本、所述S-腺苷-L-甲硫氨酸和所述甲基受体混合并反应获得反应液1；

(2)向步骤(1)中的所述反应液1中加入所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶并反应，获 得反应液2；

(3)将步骤(2)中所述的反应液2离心获得上清液；

(4)采用光度计检测步骤(3)中所述的上清液的光吸收值，间接或直接地评估所述腺苷 的产生速率以检测所述样本中所述磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶的酶活力。

4.根据权利要求3所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，所 述方法包括：在步骤(1)过程和步骤(2)过程中加入缓冲液；优选地，所述缓冲液选自甘氨 酸/氢氧化钠、柠檬酸/柠檬酸钠、磷酸氢盐/柠檬酸(盐)、磷酸盐、2-吗啉代乙磺酸缓冲液、 3-吗啉丙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、Tris-盐酸、硼酸-硼砂、巴比妥钠-盐酸 缓冲液中的一种或多种；最优选为Tris-盐酸。

5.根据权利要求4所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于：

所述缓冲液为10～1000mmol/L，优选为25～100mmol/L，最优选为30mmol/L；

所述甲基受体为0.002～10mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为0.2mmol/L；

所述S-腺苷-L-甲硫氨酸为0.02～2mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为 0.1mmol/L；及

所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶为0.01～100KU/L，优选为0.1～50KU/L，最优选为 10KU/L。

6.根据权利要求4所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，步 骤(1)中所述反应的条件为置于35℃环境中温浴60min；优选地，步骤(2)中所述反应的条件 为置于30℃环境中温浴10min；更优选地，步骤(3)中所述离心为10,000g离心10分钟。

7.根据权利要求4所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，所 述方法还包括在步骤(1)前将所述样本进行前期处理，所述前期处理为所述样本与试剂混 合，所述试剂为油酸、胆酸盐、Tween20、Brij35或牛磺胆酸钠；优选地，所述试剂在上述混 合后，达到的体积百分浓度为0.05-1％；最优选为0.5％。

8.根据权利要求7所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，在 所述前期处理后，将所述样本在冰上放置30min。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法，其 特征在于，所述S-腺苷-L-甲硫氨酸由三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S-腺苷甲硫氨酸合成酶组成 的酶反应系统所生成。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶酶活力检测方法， 其特征在于，所述样本选自生物组织、体液和细胞中的一种或多种；优选地，所述生物组织 选自肺、结肠、卵巢、胎盘、胰腺、胸腺、小肠、肾、脑和肝脏中的一种或多种，所述体液为血 液。