[发明专利]一种巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法

权利要求书

1.一种巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征在于，所述方法包 括：

(1)将含巯嘌呤甲基转移酶的样本与S-腺苷-L-甲硫氨酸和甲基受体 接触以形成S-腺苷-L-同型半胱氨酸和甲基受体的甲基化产物，

(2)通过将所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸与S-腺苷-L-同型半胱氨酸水 解酶相接触以生成高半胱氨酸和腺苷，采用光度计评估所述腺苷的产生速 率以检测所述样本中所述巯嘌呤甲基转移酶的酶活力。

2.根据权利要求1所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于，所述甲基受体选自带巯基的芳香族化合物和带巯基的杂环化合物中 的一种或两种；优选地，所述甲基受体选自巯基嘌呤、巯基嘌呤类似物和 巯基嘌呤衍生物中的一种或多种；更优选地，所述甲基受体选自巯基嘌呤、 咪唑硫嘌呤、6-硫鸟嘌呤、6-硫鸟嘌呤核苷酸、硫肌苷单磷酸盐、硫肌苷三 磷酸盐、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、巯基乙醇、溴苯硫酚、邻氨基苯硫醇、 氯苯硫酚、氟苯硫酚、硫代苯甲酸和巯基嘌呤核苷酸中的一种或多种；最 优选为6-硫鸟嘌呤。

3.根据权利要求2所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于，所述方法包括：

(1)所述含巯嘌呤甲基转移酶的样本、所述S-腺苷-L-甲硫氨酸和所 述甲基受体混合并反应获得反应液1；

(2)向步骤(1)中的所述反应液1中加入所述S-腺苷-L-同型半胱氨 酸水解酶并反应，获得反应液2；

(3)将步骤(2)中所述的反应液2离心获得上清液；

(4)采用光度计检测步骤(3)中所述的上清液的光吸收值，间接或 直接地评估所述腺苷的产生速率以检测所述样本中所述巯嘌呤甲基转移酶 的酶活力。

4.根据权利要求3所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于，所述方法包括：在步骤(1)过程和步骤(2)过程中加入缓冲液； 优选地，所述缓冲液选自乙酸钠/乙酸、柠檬酸/柠檬酸钠、磷酸氢盐/柠檬 酸(盐)、磷酸盐、柠檬酸/氢氧化钠/盐酸、2-吗啉代乙磺酸缓冲液、3-吗啉 丙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、Tris-盐酸、硼酸-硼砂缓冲液 中的一种或多种；最优选为磷酸钾缓冲液。

5.根据权利要求4所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于：

所述缓冲液为10～1000mmol/L，优选为25～100mmol/L，最优选为 30mmol/L；

所述甲基受体为0.002～10mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优选为 0.2mmol/L；

所述S-腺苷-L-甲硫氨酸0.02～2mmol/L，优选为0.05～0.5mmol/L，最优 选为0.1mmol/L；及

所述S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶0.01～100KU/L；优选为 0.1～50KU/L，最优选为10KU/L。

6.根据权利要求4所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于，步骤(1)中所述反应的条件为置于30℃环境中温浴60min；优选地， 步骤(2)中所述反应的条件为置于30℃环境中温浴10min；更优选地，步 骤(3)中所述离心为10,000g离心10分钟。

7.根据权利要求4所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于，所述方法还包括在步骤(1)前将所述含巯嘌呤甲基转移酶的样本进 行前期处理，所述前期处理为所述含巯嘌呤甲基转移酶的样本与试剂混合， 所述试剂为油酸、胆酸盐、Tween20、Brij35或牛磺胆酸钠；优选地，所述 试剂在上述混合后，达到的体积百分浓度为0.05-1％；最优选为0.5％。

8.根据权利要求7所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测方法，其特征 在于，所述方法还包括，在所述前期处理后，将所述含巯嘌呤甲基转移酶 的样本在冰上放置30min。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测 方法，其特征在于，所述S-腺苷-L-甲硫氨酸由三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S- 腺苷甲硫氨酸合成酶组成的酶反应系统所生成。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的巯嘌呤甲基转移酶酶活力检测 方法，其特征在于，所述含巯嘌呤甲基转移酶的样本选自生物组织、体液 和细胞中的一种或多种；优选地，所述生物组织选自心、胎盘、胰腺、小 肠、肾和肝脏中的一种或多种，所述细胞为血细胞；最优选地，所述血细 胞为红细胞。