[发明专利]蛋白酶水解肠粘膜工艺

权利要求书

1.一种蛋白酶水解肠粘膜工艺，其具体步骤如下：

将粗品肝素钠溶于 NaCl 溶液中，机械搅拌至肝素钠全部溶解，向溶液中加入 碱液直至产生沉淀，静置，过滤除去不溶物，得滤液；

将步骤 (1) 中滤液以碱液调 pH 至 9．5— 11，加入 H202 溶液，在 10— 30℃

下反应 2．5— 3．5 小时，得反应液；

将步骤 (2) 得到的反应液升温至 30— 50℃，此后每隔 2．5— 3．5 小时补加

H202 溶液，并调节 pH ；补料后共反应 15— 21h ；

向步骤 (3) 得到的反应液中加入吸附剂，磁力搅拌，过滤除不溶物，得滤液；

将步骤 (4) 中的滤液通过平衡好的凝胶色谱柱，收集低分子量的肝素钠洗脱；

将步骤 (5) 中的低分子量的肝素钠洗脱液用弱碱性离子交换树脂吸附，分别 以三种浓度的 NaCl 溶液洗脱，收集第一种 ( 最低 )、第三种 ( 最高 ) 浓度的 NaCl 洗脱液并 混合；

将步骤 (6) 中的混合洗脱液，在磁力搅拌下降温至一 5— 8℃，再用乙醇沉淀、 真空干燥得产品。

2.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (1) NaCl 溶液的质量百分浓度为 1．2— 1．8％；NaCl 溶液的用量为 2— 3mL ／ g 肝素钠粗 品量；静置时间 1— 2 小时。

3.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (1)和(2) 的碱液均为 NaOH 或 KOH 溶液 ；碱液的浓度为 1— 1．5mOl/L。

4.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (2)和 (3) 中所加入的 H202 溶液和 NaCl 溶液的体积比为 3— 5 ：100 ；步骤 (2) 中 H202 溶液的浓度为 1— 5mOl/L，步骤 (3) 中 H202 溶液的浓度为 1— 3mOl/L。

5.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (3) 中每次补加完 H20 溶液后测定 pH，使 pH 在 6．8— 7．5 之间。

6.根据权利要求1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤(4) 中所述的吸附剂为活性碳、皂土或硅酸盐；吸附剂的加入量为 3— 5g ／ 100mlNaCl 溶液量。

7.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (5) 中所述的凝胶色谱柱为 Sephadex6-25，样品层为 15— 25％柱床体积，柱的径／高为 1 ：5— 7 ；以质量百分浓度 4—6％ NaCl 溶液平衡并洗脱，流速为一个柱床体积／ 1．5—2 小时，收

60— 90mim 时的洗脱液。

8.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (6) 中三种浓度的 NaCl 溶液分别为 0．1— 0．3g/L、0．4— 0．6g/L、0．7— 0．9g/L ；其洗脱时 间均为 1．8— 2．5 小时，样品层为 15— 25％柱床体积。

9.根据权利要求 1 所述的蛋白酶水解肠粘膜工艺，其特征在于：步骤 (6) 中所用的弱碱性离子交换树脂是 D301、D315、D318 或 330，柱的高／径比为 6— 8 ：1。