[发明专利]一种药桑多糖提取物的制备及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药桑多糖提取物的制备及其检测方法。

背景技术

药桑属黑桑种(MorusnigraLinn)，为天然22倍体半栽培类型野生桑树种质资 源，仅分布于新疆阿克苏、和田和喀什地区，是新疆独特的药用果桑种质资源，药桑椹更是 作为维吾尔族重要的民间药材，维吾尔族称其为“夏图土”。能健脑安神、益脾胃、补血养肝， 用于治疗心悸失眠、健忘、脾胃虚寒和黄疸肝炎等疾病。

高效毛细管电泳法（HPCE）是近年发展起来的一种具有高效快速、灵敏度高、自动 化高、经济环保等优点，已成为生物化学和分析化学领域中发展最快的一种分离分析技术， 已引起药物分析界的广泛重视。但也存在着重现性差、制备能力差等缺点。

目前为止，现有技术一般采用水煮醇沉法提取药桑多糖，但多糖产率不高。且缺少 一种对药桑多糖提取物进行评价的方法，使得提取物的质量参差不齐，不利于工业化生产。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的上述不足，提供了一种药桑多糖提取物的制备方 法，以提高药桑多糖提取物的产率。

本发明的另一目的是提供一种药桑多糖提取物的检测方法，以对药桑的提取质量 进行评价，实现控制提取质量的稳定。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种药桑多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：

（1）将药桑粉末和蒸馏水混合,在60℃下超声提取两次，每次提取30分钟，料液比1:10 （g/mL），过滤，合并滤液，浓缩；

（2）将步骤（1）浓缩得到的浓缩液与乙醇按体积比1:4混合，静置醇沉24小时；

（3）将步骤（2）醇沉得到的沉淀减压干燥，即得到药桑多糖提取物。

进一步，步骤（1）超声提取时，超声波频率为59KHz。

进一步，步骤（1）滤液浓缩后的体积与药桑粉末的质量比为1mL：1g。

一种药桑多糖提取物的检测方法，包括如下步骤：

（1）药桑多糖提取物在三氟乙酸水溶液中进行酸水解，酸水解后，除去三氟乙酸，残余 物用水溶解，得供试液；

（2）单糖混合标准溶液的衍生化：向单糖混合标准溶液中加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑 啉酮，在碱性条件下加热反应，冷却，加酸中和，然后用氯仿萃取，取上层液，所述单糖为葡 萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、木糖和/或阿拉伯糖；

（3）将步骤（2）得到的上层液上毛细管电泳仪检测，获得浓度与峰面积的标准曲线，电 泳条件：缓冲液采用浓度为180mmol/L、pH=10.05的硼酸缓冲溶液，电压15kV，检测波长 245nm；

（4）步骤（1）的供试液先按步骤（2）的衍生化方法进行处理，再按步骤（3）的电泳条件上 毛细管电泳仪检测；

（5）根据步骤（4）检测得到的峰面积以及步骤（3）的标准曲线，得到供试液中葡萄糖、甘 露糖、半乳糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、木糖和/或阿拉伯糖的浓度。

进一步，步骤（1）在105℃下酸水解4小时，三氟乙酸水溶液的浓度2mol/L。

进一步，步骤（1）酸水解后，向体系加入甲醇，蒸发浓缩除去三氟乙酸。

进一步，步骤（2）在pH=10-12的碱性条件下，于70℃反应30min。

衍生化时，相对于单糖而言，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的用量保持过量。

与水浴提取相比，本发明采用超声波辅助提取可以明显提高药桑多糖提取物的产 率。而本发明提供的检测方法具有良好的重复性、稳定性和精密度，从而可用于评价药桑提 取质量，以实现提取质量的稳定控制。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实 施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为单糖混合标准品PMP衍生物的毛细管电泳谱图；

图2为药桑多糖提取物水解后PMP衍生物的毛细管电泳谱图。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用 于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

1.1材料与试剂