[发明专利]一种治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物的鉴别和检测方法，其特征在于，步骤如下：

鉴别方法：

（1）取益生菌发酵中药复方组合物5ml，用盐酸调pH至1-2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次5ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；取黄芩苷对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2ul、对照品溶液1ul分别点于同一聚酰胺薄膜上，以5：3：1：1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点；

（2）取鉴别方法（1）项下供试品溶液为供试品溶液；取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12：2：1：0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同蓝灰颜色的斑点；

（3）取益生菌发酵中药复方组合物20ml，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，水浴蒸干正丁醇液，残渣用甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；取柴胡对照药材细粉0.5g，加甲醇30ml，超声提取30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、柴胡对照药材溶液5ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以13：7：2的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

（4）取益生菌发酵中药复方组合物20ml，用浓氨试液调pH至9-10，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至1ml，作为供试品溶液；取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ul、对照品溶液2ul，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以10：6：1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中熏蒸约5分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄绿颜色的荧光斑点；

检测方法：

A、对照品溶液的制备：称取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml约含0.2mg的溶液，即得；

B、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

C、测定法：精密量取本发明的益生菌发酵中药复方组合物5ml，缓缓加入无水乙醇7.5ml，边加边振摇，再加60%乙醇12ml，摇匀，密封，离心，上清液转移至25ml容量瓶中，加少量60%乙醇清洗沉淀并定容至刻度；精密量取10ml加水定容至100ml，摇匀，即得供试品溶液；精密吸取供试品溶液5ml，置25ml容量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取供试品溶液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中芦丁的量，计算，即得；

益生菌发酵中药复方组合物中每1ml含总黄酮按芦丁C₂₇H₃₀O₁₆计，不得少于2.8mg；

所述的治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物，是将中药复方药材进行水提后，加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和无机盐，添加或不添加甜味剂，高温灭菌，经益生菌发酵后稳定化处理制成；

所述的中药复方由如下重量份的原料药组成：

柴胡12-40重量份、黄芩12-40重量份、红参4-24重量份、 田基黄48-96重量份、垂盆草48-96重量份、炙鳖甲36-80重量份、丹参36-48重量份、夏枯草24-60重量份、生牡蛎36-80重量份、延胡索12-40重量份、片姜黄12-36重量份、猪苓24-40重量份、炙甘草8-36重量份；

所述的益生菌选自双歧杆菌和乳杆菌。