[发明专利]一种测定小而密脂蛋白的试剂、方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种测定小而密脂蛋白的试剂、方法和试剂盒。

背景技术

血液中存在的脂蛋白根据其比重大致分为高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)以及乳糜微粒(CM)4类。其中低密度脂蛋白(LDL)是由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成。一般将LDL亚组分中颗粒较小密度较大的LDL称为小而密脂蛋白(small dense Low-Density Lipoprotein，简称sdLDL)；将颗粒较大、密度较小的LDL称为大而轻LDL，简称LgLDL；介于二者之间的亚组分为中密度LDL。近来研究发现，与普通LDL相比，sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强，是公认的引发心血管病的重要危险因素之一。

目前在临床检测应用中，测定sdLDL的方法有电泳法、超速离心法和分级沉淀法等。但这些方法检测时间很长，不能进行大规模自动化检测，且需要昂贵的仪器设备，故不能应用于一般的临床医学检测。并且，目前也不存在专门针对小而密脂蛋白的任何检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对目前缺乏专门针对小而密脂蛋白的检测方法的不足，提供一种测定小而密胆固醇的试剂、方法和试剂盒。本发明所述的试剂配制简单方便，能够高效、准确地应用于所述方法中进行特异性检测sdLDL。本发明所述的测定方法，能够特定、专一地检测小而密脂蛋白(sdLDL)。并且该测定方法可靠性高、成本低、效率高，能够大规模自动化特异性检测sdLDL。本发明所述的试剂盒操作简便，能够高效、准确地特异性检测sdLDL。

本发明通过广泛深入的研究，发现将血清样品与包括适宜浓度的聚乙烯硫酸(PVS)、聚乙二醇(PEG)、硫酸葡聚糖或磷钨酸和肝素等其他成分组成的第一试剂反应，能够较为完全地清除HDL并且掩蔽LgLDL、VLDL和CM；再与组分及其含量经特殊选择的第二试剂反应，从而进一步准确测定血清标本中sdLDL的含量。

本发明的技术方案之一是提供一种测定小而密脂蛋白的第一试剂，其包括以下的组分：

0.1～10mmol/L 4-氨基安替比林，

1mg/L～500mg/L试剂A，所述试剂A为选自聚乙烯硫酸、聚乙二醇、硫酸葡聚糖和磷钨酸中的一种或多种，所述百分比为质量百分比，

10～300U/mL肝素钠，

0.1～90mmol/L二价金属离子，

0.05～6％表面活性剂A，所述表面活性剂A为花王公司的Emulgen A90、花王公司Emulgen B66和苯乙烯苯酚聚氧乙烯(16)醚中的一种或多种，

0.5～2KU/L胆固醇酯酶，

1～3.5KU/L胆固醇氧化酶，和

100～300KU/L过氧化氢酶。

本发明所述的第一试剂中，所述4-氨基安替比林的含量为0.1～10mmol/L，较佳地为0.75～2.5mmol/L，更佳地为1.25～2.5mmol/L。

本发明所述的第一试剂中，所述试剂A为选自聚乙烯硫酸、聚乙二醇、硫酸葡聚糖和磷钨酸中的一种或多种。较佳地，所述试剂A为聚乙烯硫酸，所述试剂A的含量为1mg/L～200mg/L，更佳地为200mg/L。更佳地，所述聚乙烯硫酸的平均分子量为170K。较佳地，所述试剂A为聚乙二醇，所述试剂A的含量为0.1～0.3g/L，更佳地为0.3g/L。更佳地，所述聚乙二醇的平均分子量为6000。较佳地，所述试剂A为硫酸葡聚糖，所述试剂A的含量为0.05g/L～0.5g/L，更佳地为0.5g/L。更佳地，所述硫酸葡聚糖的平均分子量为50K。较佳地，所述试剂A为磷钨酸，所述试剂A的含量为1～3mg/L，更佳地为3mg/L。

本发明所述的第一试剂中，所述肝素钠的含量为10～300U/mL，较佳地为90～200U/mL，更佳地为100～200U/mL。

本发明所述的第一试剂中，所述二价金属离子为本领域常规的金属离子，较佳地为镁离子或锰离子，更佳地为镁离子，最佳地为硫酸镁。所述二价金属离子的含量为0.1～50mmol/L，较佳地为20～90mmol/L，更佳地为25～50mmol/L。