[发明专利]通过转基因啮齿类动物制备人源化驼类单域抗体的方法在审
| 申请号： | 201610139563.8 | 申请日： | 2016-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN105777894A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 宋海鹏;李敏;王庆东 | 申请（专利权）人： | 长春力太生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C12N15/89 |
| 代理公司： | 北京市众天律师事务所 11478 | 代理人： | 李新军 |
| 地址： | 130103 吉林省长春*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通过 转基因 啮齿 类动物 制备 人源化驼类单域 抗体 方法 | ||
1.一种通过转基因啮齿类动物制备人源化IgG单域抗体的方法，所 述方法包括以下步骤：
(1)构建含有人源化IgG抗体VHH区编码序列串联结构的细菌人工 染色体DNA；
(2)将步骤(1)获得的细菌人工染色体DNA转导入啮齿类动物受 精卵雄性原核内；
(3)将步骤(2)获得的受精卵移入假孕雌性啮齿类动物身体两侧的 输卵管内，使胚胎在代孕母体内发育，经一个完整的发育周期产下子代；
(4)鉴定出含有人源化单域抗体基因座的转基因啮齿类动物；
(5)将鉴定出的转基因啮齿类动物与采用同源重组方法敲除内源性 抗体重链IgH、轻链IgKappa和IgLamda的啮齿类动物杂交，最终获得含 有人源化单域抗体基因座，同时内源性抗体重链IgH、轻链IgKappa和 IgLamda基因被敲除的人源化单域抗体转基因啮齿类动物；
(6)从步骤(5)获得的人源化单域抗体转基因啮齿类动物中获得单 克隆单域纳米抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述啮齿类动物为小 鼠。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述VHH 区编码序列串联结构由下列序列中一个或多个序列串联而成：SEQID NO:1-13。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的导入 为显微注射。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的细菌 人工染色体DNA先被克隆入载体后传代和保存，之后再被切割释放和转 导。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述载体为pBACe3.6。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的鉴定 为PCR鉴定。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中按照 20个受精卵/侧的数量将受精卵移入假孕母鼠身体两侧内。
9.一种人源化的驼类单域抗体，其特征在于，所述抗体的可变区序 列选自SEQIDNO：14、16、18、20、22中的任一个。
10.根据权利要求9所述的抗体，其特征在于，所述抗体还含有恒定 区，所述恒定区的序列如SEQIDNO：24所示。
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