[发明专利]采用模拟移动床色谱纯化抗体

说明书

本申请是国际申请日为2011年9月16日的国际申请PCT/US2011/051874进入中国、申请号为201180055293.8的题为“采用模拟移动床色谱纯化抗体”的发明专利申请的分案申请。本申请要求2011年9月20日提交的美国专利申请第61/384,620号的申请日的权益，其内容在此整体引入作为参考。

1.技术领域

本发明涉及用于抗体(例如单克隆抗体(“mAbs”))的色谱纯化的组合物和方法，其采用改进的模拟移动床(“SMB”)分离策略以及在某些实施方案中采用拉曼光谱。

2.背景技术

蛋白质纯化策略通常采用一个或多个色谱分离步骤以将宿主细胞蛋白(“HCPs”)从最终纯化的蛋白制剂中排除。此色谱分离步骤通常以“批处理方式”来进行，其中将填充有特定的色谱固定相的单柱连续进行平衡、装载、洗涤、洗脱，并随后再生。由于批处理方式色谱法只依赖于装载的柱的动态容量，而不是装载的柱的饱和容量，因此装载和分离的每个循环仅使用该柱实际结合容量的30%至50%。因此，批处理方式分离需要使用具有当这些柱子在其饱和容量下运行时所需要的两至三倍以上体积的柱子。仅利用了30%-50%的柱的实际结合容量，批处理方式色谱法因此涉及使用明显更高的色谱分离固定相的量，且延长完成装载和分离的每个循环所需要的时间，其大幅度地增加了蛋白质纯化相关的成本。此外，如果在饱和时进行分离，使用具有两到三倍体积的柱子将是必要的，这导致单个分离循环中所使用的平衡、洗涤和洗脱缓冲液的量显著增加，造成额外的成本和时间的低效。

鉴于上述情况，本领域中需要改进的方法以更有效地纯化蛋白质，包括治疗性抗体。本发明通过将改进的模拟移动床分离策略纳入蛋白质的纯化中解决了这一需求。

3.发明内容

在某些实施方案中，本发明涉及从含靶蛋白和至少一种HCP的样品混合物制备宿主细胞蛋白(HCP)降低的靶蛋白制剂的方法。在某些实施方案中，本发明的方法包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。

本发明的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂和选自亲和色谱树脂、离子交换色谱树脂和疏水相互作用色谱树脂的色谱树脂。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。

本发明的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂并且所述靶蛋白选自：酶；肽类激素；多克隆抗体；人单克隆抗体；人源化单克隆抗体；嵌合单克隆抗体；单链抗体；Fab抗体片段；F(ab')2抗体片段；Fd抗体片段；Fv抗体片段；分离的CDRs；双抗体；DVDs和免疫粘附素。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。

本发明的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂，并且将色谱树脂充填入一系列被流体导管分隔的流体连接柱，其中流体连接柱的数量选自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个单柱。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。