[发明专利]一种基于Ion Torrent测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法

权利要求书

1.一种基于IonTorren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法，其特征在于， 具体步骤如下：

(1)目标区域扩增：将待测样本的DNA以及多重PCR引物，经多重PCR反应，得到第一样 本；

(2)引物清除：取第一样本与引物清除试剂混合进行反应，得到第二样本；

(3)接头连接：将第二样本与接头P1进行接头连接反应，得到第三样本；

(4)磁珠纯化：将第三样本进行磁珠纯化，得到第四样本；

(5)文库扩增：将第四样本加入扩增酶Mix和扩增引物进行PCR扩增，并进行磁珠纯化， 得到目的DNA文库；

(6)文库检测：将得到的文库采用Qubit和11～13％的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测文库浓 度、文库片段大小及文库质量，即得；

所述11～13％的PAGE配方为：水，3～4mL；30％丙烯酰胺，2022～2062μL；5*TBE，1.2～ 1.8mL；9～11％AP，100～120μL；TEMED，9～11μL。

2.根据权利要求1所述的基于IonTorren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建 方法，其特征在于，步骤(1)中的多重PCR引物为IonAmpliSeq^TMBRCA1andBRCA2Panel。

3.根据权利要求1所述的基于IonTorren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建 方法，其特征在于，步骤(1)中的反应体系为10μL体系，反应体系的组成成分具体为：

4.根据权利要求1所述的基于IonTorren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建 方法，其特征在于，步骤(1)中PCR反应的循环数为18。

5.根据权利要求1所述的基于IonTorren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建 方法，其特征在于，步骤(2)中的引物清除试剂为FuPaReagent^TM，加入量为每个上述10μL PCR体系加入0.9～1.1μL引物清除试剂。

6.根据权利要求1所述的基于IonTorren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建 方法，其特征在于，步骤(3)的接头P1为：

5'CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT3'

5'ATCACCGACTGCCCATAGAGAGGAAAGCGGAGGCGTAGTGGTT3'。