[发明专利]一种用于骨癌检测的适配子及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于骨癌检测的适配子及其试剂盒。

背景技术

骨癌(Osteosarcoma)，其是一种由骨骼系统长出的恶性肿瘤，且为骨肿瘤中最常见的一种，会侵犯邻近的组织及器官，也可能会转移至远处的其它器官，好发于年纪介于十岁至二十岁之间的小孩及青少年身上，且男性发生几率略高于女性。骨癌的致病原因迄今未明，由它的原发部位和多发生于快速生长的年纪，显示其跟成骨细胞的活性增加可能有关，而遗传因素在骨癌似乎也扮演一个角色，此外也可能与慢性发炎、辐射或病毒感染有关。

目前针对骨癌的检测一般都是都是抽血采用胶体金技术进行检测，比如CN103267856B中公开的试纸检测，但是该检测方法具有一定的局限性，检测浓度有限制，并且准确性也有待提高。

SELEX技术是20世纪90年代初发展起来的一种新的组合化学技术。利用该技术可以从随机单链寡核苷酸库中筛选到特异性与靶物质高度亲和的核酸适配体。其基本思路是体外化学合成一个单链寡核苷酸库，与靶物质混合，形成靶物质-核酸复合物，洗脱未结合的核酸，分离与靶物质结合的核酸分子，并以此核酸分子为模板进行PCR扩增，再进入下轮的筛选。通过重复的筛选与扩增，一些与靶物质不结合或与靶物质有低亲和力、中亲和力的核酸分子被洗去，而与革G物质有强亲和力的核酸分子从非常大的随机库中分尚出来，且纯度随SELEX过程的进行而增高，最后占据库的大多数(>90％左右)。自Tuerk和Ellington等首先运用此技术筛选到特异性吸附噬菌体T4DNA聚合酶和有机染料分子的特异核酸适配体后，经过十几年的发展，SELEX技术已经成为一种重要的研宄手段和工具。因此，采用selex技术，筛选特定的结合骨癌细胞的适配体具有较为重要的意义。

发明内容

本发明的技术方案通过以下步骤实现：

本发明的目的是提供一种骨癌细胞的核酸适配体序列。

本发明中，所述的骨癌细胞的核酸适配体(序列1-29)能够特异结合骨癌细胞细胞。

本发明中，所述的骨癌细胞选自骨髓瘤细胞株XG7细胞。

本发明的进一步的目的是提供所述核酸适配体序列的用途。本发明中根据对该序列应用，可进一步用于制备特异性分离人骨髓瘤细胞株XG7的试剂盒。

从体外合成的随机寡聚DNA文库，5’-ATTCGACATGCCTGGACATA(N36)CATGCCACATGACCAAGGCA-3’。中筛选出与骨髓瘤细胞株XG7特异结合的核酸适配体；将筛选出的序列用引物F(5，-FAM-ATTCGACATGCCTGGACATA-3，)和R(5，-biotin-TGCCTTGGTCATGTGGCATG-3’)进行扩增并进行TA克隆入pMD19-T载体(购自上海博光生物公司)，转化DH5a细菌(购自北京天根生物公司)；挑去白色菌落进行PCR确定阳性克隆后，抽提质粒并测序反应，上测序仪测序。

本发明采用核酸适配体的体外筛选(SELEX)技术，以骨髓瘤细胞株XG7为正筛靶标，以人骨髓间充质干细胞为反筛靶标，筛选与骨髓瘤细胞株XG7特异结合的核酸适配体，制得具有特异结合骨髓瘤细胞株XG7的序列，本发明中命名为适配体GSL1-GSL29。序列如下：

GSL1：

TCGACATGCCTGGACATATAACCCCCCTTCTCAAACAATATTCAAATTTCTATACATGCCACATGACCAAGGCA

GSL2：

ATTCGACATGCCTGGACATACCTTTTAACACAACCTACCTTCTTTCCTACACATCCCATGCCACATGACCAAGGCA

GSL3：

ATTCGACATGCCTGGACATAAACCACATTAATACATCTTATAATTATTCTTACTACCATGCCACATGACCAAGGCA

GSL4：

ATTCGACATGCCTGGACATATATCACACTACATTATATTCTTCTCCACCCTTATCTCATGCCACATGACCAAGGCA

GSL5：

ATTCGACATGCCTGGACATACTTAAAATACACCCTAAATTCTTACATAAATAACAACATGCCACATGACCAAGGCA

GSL6：

ATTCGACATGCCTGGACATACTCAAATAATCACTTATACAAAAAAACTCTATTTTTCATGCCACATGACCAAGGCA