[发明专利]一种ES-2肽的季铵化壳寡糖修饰物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种ES‑2肽的季铵化壳寡糖修饰物，由ES‑2肽分子上的羧基与季铵化壳寡糖分子的氨基通过酰胺键结合，结构式为：(ES‑2)n‑CO‑NH‑O‑HTCC；式中，n＝1～10；ES‑2的分子量为1223Da，等电点为10.42；O‑HTCC的分子量为1000Da以上，自由氨基摩尔含量为不小于20％。本发明还公开了ES‑2肽的季铵化壳寡糖修饰物的制备方法。本发明的ES‑2肽的季铵化壳寡糖修饰物与ES‑2相比，保留了ES‑2分子抗新生血管生成活性和抗肿瘤活性，整合了O‑HTCC的良好特性，使其具有稳定性高、半衰期长、细胞亲和性强、靶向性强等的特性；与TMC相比，O‑HTCC修饰ES‑2的效率更高，因此具有更好的使用效果和应用范围。

技术领域

本发明涉及一种ES-2肽的季铵化壳寡糖修饰物及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

内皮抑素(Endostatin，ES)是一种内源性的新生血管生成抑制因子，能够有效地抑制新生血管的形成，从而切断肿瘤的营养供给途径和废物代谢途径，起到抑制肿瘤的生长和转移的作用。ES-2肽(IVRRADRAAVP)是ES结构中一个具有明显抗新生血管生成、抗肿瘤活性的短肽段，更容易进入细胞内部，且更容易获得和改造，但是同ES一样，ES-2肽也存在体内半衰期短和稳定性差等缺点，这些缺点大大的限制了ES-2肽进一步的应用。

壳寡糖是目前发现的自然界存在的唯一一种阳离子多糖，结构明确且有靶向性，经季铵化后能进一步提高其带正电荷的能力。

N,N,N-三甲基季铵化壳聚糖(TMC)制备过程中，壳寡糖的2-NH₂被甲基化后首先生成2-NH(CH₃)甚至2-N(CH₃)₂，然后才能进一步形成2-N(CH₃)₃⁺季铵基团，因此，水溶性良好的TMC中的自由氨基数量极少(一般<10％)，导致其对ES-2的结合效率较低、结合物活性保持率差，制约了季铵化壳寡糖对ES-2肽分子进行化学修饰。

而且，由于ES-2短肽分子量较小，且等电点位10.42，属于碱性蛋白，所以用同带正电荷的季铵化壳寡糖对其进行修饰的难度相较于对其他非碱性蛋白修饰的难度要大的多。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种ES-2肽的季铵化壳寡糖修饰物及其制备方法。

由于在肿瘤发生和发展过程中，新生血管的生成会为肿瘤组织提供营养并运走废物，因此如果抑制肿瘤引起的新生血管的生成，就可以起到“饿死肿瘤”的作用；在糖尿病等疾病过程中，新生血管的生成会导致出血等严重反应，对于新生血管的生成的抑制可以明显治疗病人视网膜病变等并发症。因此，本发明的另一个目的是提供该ES-2肽的季铵化壳寡糖修饰物在制备抗新生血管生成和/或抗肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种ES-2肽的季铵化壳寡糖修饰物，由ES-2肽分子上的羧基与季铵化壳寡糖(O-HTCC)分子的氨基通过酰胺键结合，结构式如下：

(ES-2)n-CO-NH-O-HTCC；

式中，n＝1～10；ES-2的分子量为1223Da，等电点为10.42；O-HTCC的分子量为1000Da以上，自由氨基摩尔含量为不小于20％。

优选的，所述n＝1～5，即一分子O-HTCC与1～5分子ES-2共价结合形成修饰物；O-HTCC的分子量为1000Da～10000Da，自由氨基摩尔含量为不小于50％。