[发明专利]基于KISS-1基因的猪繁殖性状相关的分子标记及其检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物分子育种领域，尤其涉及一种基于KISS-1基因的猪繁殖性 状相关的分子标记及其检测方法和应用。

背景技术

分子标记辅助选择是基因工程在现代家畜育种中的一项重要应用，利用与育 种性状相关的各种标记代替以表型为基础的选择，从分子水平上分析个体的遗传 组成，从而实现对基因型的直接选择，可克服直接选择的弊端，提高选择的准确 性和缩短世代间隔。

总产仔数、产活仔数等猪的繁殖性状是重要的经济性状，直接关系到养猪业 的经济效益。

KISS-1基因是LeeJH等于1996年利用消减杂交的方法研究人黑瘤素细胞 不同转移能力时发现并命名，具有抑制肿瘤转移作用。人KISS-1基因被定位于 1q32-41，包含4个外显子和3个内含子，前2个外显子不翻译。KISS-1基因的 编码产物为kisspeptin，是G蛋白偶联受体54(Gprotein-coupledreceptor54, GPR54)的配体，并组成KISS-1/GPR54系统。越来越多的研究表明，KISS-1/GPR54 系统在哺乳动物初情期的启动中起关键作用，kisspeptin对下丘脑-垂体-性腺轴具 有重要调控作用。目前，尚未见KISS-1基因与猪繁殖性能关联分析的报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种基于KISS-1基 因的猪繁殖性状相关的分子标记，为猪的分子育种提供新的思路，本发明的另一 个目的是提供所述分子标记的检测方法和应用。

技术方案：本发明所述的一种基于KISS-1基因的猪繁殖性状相关的分子标 记，它为猪KISS-1基因片段，所述的猪KISS-1基因片段含有多态性位点，所述 的多态性位点位于猪KISS-1基因的核苷酸序列中第41位，所述的多态性位点具 有G/T碱基的变异。

猪KISS-1基因序列的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，所述的多态性位点， 与猪总产仔数、产活仔数紧密相关，可利用该位点开发与猪繁殖性状相关的分子 标记。本发明中，描述多态性位点的位置时，以基因的转录起始点核苷酸位置为 1bp，上游为负，下游为正，顺次记数，第41bp位是指KISS-1基因的转录起始 点开始的第41bp位，该位点处于SEQIDNO.4所示序列的第341bp位。

本发明所述的猪KISS-1基因片段如SEQIDNO.1所示。当然，本发明所述 的猪KISS-1基因片段也可以为包含如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的DNA 片段。根据检测方法，可以选择合适长度的能够包含多态性位点的DNA片段。

本发明还提供了所述分子标记的检测方法，包括：

(1)根据所述的分子标记的核苷酸序列设计引物；

(2)以待检测猪的基因组DNA为模板进行PCR扩增；

(3)判断PCR扩增产物中多态性位点的类型。

步骤(3)中，可对PCR产物进行测序或电泳分析，判断多态性位点的碱基 类型。

优选的，步骤(1)中，上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，下游 引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。利用该引物，可采用PCR-SSCP的方 法准确方便的检测多态性位点的类型。

本发明还提供了所述的分子标记在猪繁殖性状选择中的应用。

具体的，猪可以为小梅山猪、枫泾猪或大白猪。繁殖性状为总产仔数或产活 仔数。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明研究发现，猪KISS-1基因第1外显子存在一个突变位点(即多态性 位点)，该位点位于猪KISS-1基因的核苷酸序列中第41位，该突变位点与猪的 繁殖性状尤其是总产仔数或产活仔数相关，且容易检测，从而本发明根据该突变 位点提供了一种基于KISS-1基因的猪繁殖性状相关的分子标记，并提供了该分 子标记的检测方法及在猪繁殖性状选择中的应用，为猪分子育种、研究猪繁殖生 理机制提供基础。

附图说明

图1为实施例1中PCR-SSCP检测结果；

图2为实施例1中AA和BB基因型个体PCR产物测序结果；

图3为实施例1中AA和BB基因型个体的氨基酸比对结果。