[发明专利]一种CIK淋巴细胞的扩增激活方法

权利要求书

1.一种CIK淋巴细胞的扩增激活方法，其特征在于，使用转染了蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的宿主细胞，联合蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1、蛋白质D1共同对淋巴细胞进行扩增激活，得到CIK淋巴细胞；所述蛋白质A包含CD8α的功能片段和白介素21的功能片段；蛋白质B包含CD14的功能片段；蛋白质C包含CD19的功能片段；蛋白质D包含CD86的功能片段；蛋白质E 包含CD163的功能片段；蛋白质F包含CD137L的功能片段；蛋白质A1包含白介素2的功能片段、蛋白质B1包含IL-1α的功能片段、蛋白质C1包含IFN-γ的功能片段、蛋白质D1包含CD3 mAb的功能片段；具体步骤为：

（1）对转染了蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的宿主细胞进行辐照致死处理；

（2）在含有淋巴细胞的培养液中，加入步骤（1）处理后的宿主细胞、以及蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1、蛋白质D1共同培养7天；所述的蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的量均为50pM-1000pM；蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1的量均为10-1000IU/毫升，蛋白质D1的量为10-1000纳克/毫升；

（3）经培养后，辐照后的宿主细胞破裂，将培养后的培养液离心，获取存活的淋巴细胞沉淀，并用培养液重悬；

（4）加入辐照处理后的宿主细胞，培养7天；经培养后，辐照后的宿主细胞破裂，将培养后的培养液离心，获取存活的淋巴细胞沉淀，即得到CIK淋巴细胞；

其中，所述培养液由100体积的1640培养液和10体积的胎牛血清组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为K562细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞与淋巴细胞的数量比为宿主细胞：淋巴细胞=1-10：1。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞与淋巴细胞的数量比为宿主细胞：淋巴细胞=1-4：1。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞与淋巴细胞的数量比为宿主细胞：淋巴细胞=1：1。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F由宿主细胞在细胞膜表面即时表达，蛋白质A1、蛋白质B1、蛋白质C1、蛋白质D1为纯化的蛋白质；所述纯化是指质量分数在90%以上。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F分别为CD8α-白介素21复合物、CD14、CD19、CD86、CD163和CD137L，其中，CD8α为在宿主细胞膜上表达的膜蛋白，CD8α连接白介素21后使得白介素21表达在细胞膜上，成为跨膜蛋白；CD14、CD19、CD86 和CD137 L均为膜蛋白。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述淋巴细胞选自外周血淋巴细胞、脐带血淋巴细胞、CIK细胞中的一种或多种，或者为外周血淋巴细胞、脐带血淋巴细胞、CIK细胞中的一种或多种和其它淋巴细胞的组合，或为白介素21、CD14、CD19、CD86、CD163、CD137L、白介素2、 IL-1α、 IFN-γ、CD3 mAb中的一种或多种按照任意比组成的混合物作用于人体血管中的血液所产生的淋巴细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，转染了蛋白质A、蛋白质B、蛋白质C、蛋白质D、蛋白质E、蛋白质F的宿主细胞是蛋白稳定表达系统。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辐照的剂量为100Gy-1000Gy。