[发明专利]表达J亚群禽白血病病毒Gag和Env基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种表达J亚群禽白血病病毒(ALV‑J)Gag和Env基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，属于医学或兽医学技术领域。本发明利用重组克隆技术，将包含ALV‑J Gag和Env基因以及CAG启动子序列的基因片段CAG‑ALVGE插入到鸡马立克氏病病毒弱毒疫苗814株的US2基因内部，构建获得在US2基因内部插入CAG‑ALVGE表达框的重组粘粒，由其拯救获得表达ALV‑J Gag和Env基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株。研究表明，本发明获得的疫苗株具有与亲本毒814疫苗株同等的体外复制能力以及良好的遗传稳定性，并且能够同时抵抗MDV超强毒株以及ALV‑J超强毒株的攻击。由此可见，本发明获得的表达ALV‑J Gag和Env基因的重组MDV疫苗株可以用于制备预防或治疗禽白血病和鸡马立克氏病的药物。

技术领域

本发明涉及一种重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，特别涉及一种表达J亚群禽白血病病毒Gag和Env基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，本发明属于医学或兽医学技术领域。

背景技术

禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)引起的禽类造血组织中某些细胞成分过度增生的肿瘤性疾病。根据致病性和宿主的不同，ALV被划分为A-J 10个亚群，其中A-D为外源性病毒，主要感染蛋鸡，A、B亚群主要诱发鸡的淋巴细胞白血病。J亚型禽白血病病毒(ALV-J)是由英国的Payne于1991年首次从肉用型鸡中分离出来的一个新的囊膜亚群(Payne,L.N.,Brown,S.R.,Bumstead,N.,Howes,K.,Frazier,J.A.,Thouless,M.E.,1991.A novelsubgroup of exogenous avian leukosis virus in chickens.The Journal of generalvirology 72(Pt 4),801-807.)。该病毒可通过水平传播和垂直迅速地感染整个鸡群，其水平传播能力明显强于其他亚群。目前ALV的主要防治途径是通过种群检测淘汰阳性感染鸡只，达到种群净化切断垂直传播的途径，来减少该病给养殖业带来的损失。但是，由于我国的养殖模式多样性，养殖场数量多、分布散等特点，在我国地方鸡群中实施ALV-J的净化需要若干世代，周期长，且花费高，要实现对我国的商品代鸡群以及地方品系鸡群的完全净化，几乎是不可能完全实现的。因此探索ALV-J净化过程中的适用技术和疫苗药物使用可以缩短净化周期，加快净化进程，极具应用价值和实践意义。

马立克氏病(MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的一种鸡的传染性肿瘤病，以淋巴组织增生和肿瘤形成为特征。马立克氏病是鸡的主要疾病之一，也是国内外50年代以来最受重视的鸡病。MDV属于α-疱疹病毒亚科马立克氏病样病毒属，是一种细胞结合性疱疹病毒，其基因组为线状双股DNA，约为180kb。该病可引起鸡发生多发性淋巴瘤，导致鸡只衰竭、死亡，同时损伤鸡体的免疫器官，产生严重的免疫抑制，易并发其他疾病。该病病程较长，并且发生该病后常导致整个鸡群的淘汰，一旦发生该病，损失往往特别巨大。疫苗是控制该病的主要手段，在种鸡群、蛋鸡群中MD疫苗是必须使用的疫苗，肉鸡群中使用该疫苗可以较大幅度地提高养殖效率(Morgan,R.W.,Cantello,J.L.,McDermott,C.H.,1990.Transfectionof chicken embryo fibroblasts with Marek's disease virus DNA.Avian diseases34,345-351.)。MDV血清I型弱毒疫苗814株是一株自然弱毒株，该疫苗株自从上世纪80年代研制成功以来，已安全使用30余年，没有任何不良反应(孙百明.马立克氏病的免疫及疫苗研究进展.中国预防兽医学报，2011，33:988-991.)。814疫苗株具有良好的免疫原性，保护效果与CVI988/Rispens株相当。同时，814疫苗株也是我国自主研制的，唯一有效应用的、具有自主产权的MD疫苗。

鸡马立克氏病(MD)和禽白血病(ALV)是两种主要的危害禽类的免疫抑制性疾病，其在国内的广泛流行给我国养禽业带来了巨大的经济损失。近年来，两种病毒的混合感染造成的危害更加严重，也增加了防控的难度。