[发明专利]用于抗体药物递送的红细胞膜包裹的抗体纳米粒子及制备方法

说明书

本发明公开了一种用于抗体药物递送的天然红细胞膜包裹抗体纳米粒子及制备方法。本发明中的红细胞膜提取自实验鼠，在经过处理后去除了大部分内容物和无关蛋白，并用得到的红细胞膜包裹抗体形成的蛋白纳米粒子。这种方法适用于红细胞膜包裹各种抗体形成的纳米粒子，可以提高游离型抗体的稳定性、体内循环时间，并降低机体免疫清除率。

技术领域

本发明涉及抗体药物和纳米医药技术领域，具体地说是一种用于抗体药物递送的红细胞膜包裹的抗体纳米粒子及制备方法。

背景技术

与传统小分子抗癌药相比，由于具有高特异性和强亲和力，抗体正日益成为最重要的抗癌药物之一。与其相比，尽管小分子抗癌药有一定的药效，并目前在化疗中仍然使用广泛，但其仍存在非特异性毒性（因针对所有分化细胞）和治疗窗小等缺点。另外，小分子抗癌药的耐药性也是其临床使用中常出现的问题，这些缺点给化疗病人带来了很多痛苦。而抗体因其对非特异性细胞毒性低、人体免疫原性低、生物可降解和生物相容性好等优点，已经越来越受到重视。

随着对不同类型癌细胞异常信号通路的研究进一步发展，肿瘤标志物中许多关键的调节因子也逐渐成为了分子靶向治疗的靶点。但由于抗体难以穿透细胞膜进入细胞内部，导致目前发现的许多细胞内的有效靶点如TERT、磷酸酶 / 激酶转录因子等不能用抗体阻断，很大程度上阻碍了针对细胞内部抗原的抗体的成药性。游离抗体的体积过大影响了其穿透肿瘤的能力，高间隙压阻止了大分子在肿瘤中的扩散，这些因素进一步影响了肿瘤细胞对抗体药物的摄取，成为阻碍治疗进展的关键问题之一。抗体作用的靶点分为细胞内和细胞外，人们通常将注意放到细胞外靶点上以获得更高的抗体-抗原接触机会，而对细胞内靶点的药物研究少之又少。实际上，胞内靶点是一个巨大的资源，因为他们既有更高的特异性，在与抗体接触后又有很高的杀伤率。但目前极少人尝试以细胞内抗原为靶点探讨抗体纳米粒子的摄取和作用。

另一方面，抗体是一种不稳定的蛋白，其暴露在外部的结构很容易受外界环境影响而失活，因此许多抗体在静脉注射后体内滞留时间短，这也阻碍了抗体药物的发展和应用。为了增加抗体半衰期，人们做了很多努力。如PEG化已经成为增加循环时间的金标准，但同时也存在一些问题，如产物纯度不够、对修饰分子的选择性高、可能增加药物毒性、大分子PEG排出体外困难等等。对于如何增加抗体循环时间仍需要有更深入的研究。

再则，一定粒径的外源性粒子在体内易被网状内皮系统识别并清除，这在一定程度上大大减少了大分子药物在体内的作用时间。粒子的粒径、表面电荷等对于这一问题都有着很大的影响。而红细胞膜身为体内内源性物质，由于其表面携带一些特定蛋白如CD47，可以帮助其逃脱网状内皮系统的吞噬。我们可以利用红细胞膜这一特点，给大分子药物穿上“外衣”，以降低巨噬细胞吞噬，延长体内作用时间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纳米粒子的制备方法，利用该方法可制备出抗体纳米粒子，再用处理好的红细胞膜包裹，以期得到一种红细胞膜包裹的抗体纳米粒子。

本发明的另一目的是提供一种纳米粒子在药物递送中的应用，即针对抗肿瘤药物的临床应用限制，利用上述红细胞膜包裹的抗体纳米粒子，可提高抗体的疗效和生物利用度，同时此纳米粒子具有高癌细胞摄取率、低网状内皮系统清除率，及明显延长体内作用时间的特点。

实现本发明目的的具体技术方案是：

一种用于抗体药物递送的纳米粒子，特点在于其蛋白核心为等电点沉淀制成的抗体纳米粒子，外包裹红细胞膜。

一种上述用于抗体药物递送的纳米粒子的制备方法，该方法包括以下具体步骤：

1）制备红细胞膜

完全麻醉SD大鼠后心脏取血，将血转移至含肝素钠的 EP 管中；全血离心,弃去上层清液，留下暗红色沉淀，PBS 洗涤，离心机离心，再洗涤数次；弃去上层清液，留下沉淀，取PBS吹散，取0.2mM EDTA放入离心管混匀，充分溶血后，加入20*PBS，离心，再溶血离心数次；弃去上层清液，沉淀即为红细胞膜；