[发明专利]一种结构特异性核酸酶FEN1的单克隆抗体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种结构特异性核酸酶(FEN1)的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及所述的抗体的应用。

背景技术

基因组稳定性的维持，以及DNA的复制和修复，都需要一系列的核酸内切酶和外切酶的参与，结构特异性核酸酶1(flapendonuclease1,FEN1)就是其中之一。FEN1能识别特定的DNA分叉结构，并切除含有游离5’端的单链核酸。在DNA复制过程中，FEN1通过其外切酶、内切酶活性去除了冈崎片段前端RNA引物的最后一个核糖核苷，在DNA修复中，FEN1以其内切酶活力参与了损伤碱基的修复过程(1)。由于FEN1在DNA复制和修复中的重要性，一旦编码FEN1的基因有所缺陷就会导致FEN1在体内含量的不正常增多或者减少，或发生功能性变异，从而引起基因组的不稳定，导致肿瘤或者癌症的发生。

FEN1属于XPG/Rad2核酸家族中的一个成员，拥有5’分叉内切酶(FEN)，5’外切酶(EXO)和切口依赖核酸内切酶(GEN)等3种结构特异的核酸酶活性。FEN1基因在人类基因组中被定位在染色体的11q12.2上(2)，包含了2个外显子与1个内含子。其中外显子的1141个碱基编码FEN1的380个氨基酸残基，总分子量约42KD(3)。

FEN1作为一种结构特异性核酸酶，主要参与了DNA复制时冈崎片段成熟过程中RNA引物的切除，长片段碱基切除修复，DNA二级结构的分解，DNA复制叉的维持和促进细胞凋亡诱导的DNA片段生成等过程。在这些过程中会形成很多类似皮瓣的瓣状结构，而FEN1主要识别这种结构，并通过其活性将其切除，以维持DNA的稳定性。在FEN1发挥功能的过程中，可与不同的蛋白质结合，从而影响其参与不同的DNA复制和修复途径。迄今为止，已发现至少20多种蛋白质与FEN1之间存在着相互作用。PCNA是一个DNA聚合酶的附属因子，它在细胞S期DNA复制过程中是必需的，对损伤DNA的NER过程中的碱基重新合成也有作用。而对于FEN1的功能，PCNA与它的结合十分重要。FEN1的28个氨基酸区域(AA328-355)有与PCNA结合活性(4)。FEN1在有PCNA刺激的条件下可提高5-50倍的剪切效率，PCNA能增加FEN1到剪切位点后的结合稳定性，也许会有更强的剪切效率(5)。FEN1突变会改变它与PCNA的结合，减少它在复制中的活性，会造成DNA复制扩增，从而引起癌症与遗传性疾病(6)。

FEN1在核酸或蛋白质水平上的高表达会对肿瘤的发生产生影响。在转移性前列腺癌细胞、乳腺癌、胃癌细胞、神经母细胞瘤、胰腺癌、肺癌细胞株中均可见其表达的上调(7)。通过研究FEN1在前列腺癌中的表达情况，并比较原发性前列腺癌、前列腺上皮内肿瘤、良性前列腺增生和正常前列腺上皮内FEN1的表达情况发现FEN1在前列腺癌中的平均表达水平为36.7％，远高于正常水平13.2％，而在良性前列腺增生中为14.5％，前列腺上皮内肿瘤为15.4％，这说明FEN1在前列腺癌中过高表达，而且其表达增高的程度与细胞的去分化有关。其结果暗示FEN1可能会做为前列腺癌的一种诊断标志。

FEN1作为一种结构特异性核酸酶，参与了众多的生命过程，对其结构与功能的研究一直是DNA复制和损伤研究领域的热点。对于FEN1与肿瘤的关系的研究表明它很可能作为一种肿瘤的标记物用于肿瘤的早起诊断。

发明内容

本发明一方面提供了一种杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤细胞系的保藏号为CGMCCNo.12013。

本发明另一方面提供了一种由前述的杂交瘤细胞系分泌的结构特异性核酸酶1的单克隆抗体，其特征在于，其能够特异地结合结构特异性核酸酶FEN1。

本发明再一方面提供了前述的杂交瘤细胞及前述的单克隆抗体在检测靶结构特异性核酸酶1中的应用。

本发明再一方面提供了包含前述的杂交瘤细胞和/或前述的单克隆抗体的试剂盒。

本发明再一方面提供了前述的杂交瘤细胞及前述的单克隆抗体在检测癌细胞的试剂盒中的应用，所述癌细胞优选为前列腺癌、乳腺癌、胃癌细胞、神经母细胞瘤、胰腺癌、肺癌、宫颈癌。

附图说明

图1、FEN-1抗体十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测。

图2、免疫印迹检测不同裂解液(CHO-K1、Raji、Raw264.7、C6、PC-12、COS7、3T3、Hela、Jurkat)中FEN-1蛋白的表达(抗体稀释倍数1:1000)。