[发明专利]一种凝乳酶的应用及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种凝乳酶YS-1的应用及其制备方法。该凝乳酶YS-1是由枯草芽孢杆菌YB-3菌株(Bacillus subtilis YB-3)分泌而成，该菌已于2009年4月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，电话：(027)68754052，传真：(027)68754833，E-mail：cctcc@whu.edu.cn，其保藏号为CCTCC NO：M209075。

背景技术:

功能性消化不良(FD)是一种在世界范围内非常普遍的胃肠疾病。流行病学调查发现FD在西方国家的发病率约为20-25％，在我国城市人口中消化不良的发病率也高达20％～54％。功能性消化不良是由胃和十二指肠功能紊乱引起的一组临床症状并经检查排除同样会出现上述症状的器质性疾病，其症状主要以持续性或反复发作的上腹疼痛、餐后饱胀、上腹灼热感或早饱之一种或多种并可能伴有食欲不振、嗳气、恶心、呕吐等，在中医学上属于“痞满”、“胃脘痛”、“积滞”。FD会使患者的生活质量明显下降且产生巨大的医药费用。FD的确切的病理生理机制至今尚不明确，许多研究表明其可能与胃肠道动力障碍、内脏高敏感性、精神因素、神经-内分泌调节紊乱、幽门螺杆菌感染等多种因素有关。

目前对FD的治疗药物有化药、中药及生物酶类药三类。化药治疗常以促胃肠动力药物为主，多潘立酮等促胃肠动力药虽然对FD的治疗效果较好，然而其使用时会出现严重的副作用如多潘立酮有出现严重室性心律失常和增加心源性猝死的风险、西沙比利会导致罕见的严重的心率失常。中药对FD的治疗常会根据患者的病因机制不同，辩证服用不同治疗药物。生物酶类药的主要成分是消化酶，多在人体内就生理存在，一般对患者安全无毒副作用，在临床上广泛用于FD的治疗。有文献报道多种消化酶制剂较安慰剂对FD有更好的治疗效果。

凝乳酶是一种能够水解酪蛋白的酶，其与胃蛋白酶合用可以提高胃蛋白水解蛋白的能力。婴儿体内凝乳酶含量较多，它可使进入婴儿胃内的母乳变成半固体，增加在胃内的存留时间，使母乳可以得到充分的吸收，此外还可以防止婴儿吐奶。另外凝乳酶与胃蛋白酶结合能加快蛋白质分解，促进黏蛋白生成，缓解胃炎产生的消化不良症状。

复合凝乳酶胶囊，它是一种由羔绵羊胃提取物制成的生物酶类药物，其药效成分主要是羔绵羊凝乳酶和胃蛋白酶。许多研究表明其可以治疗功能性消化不良，然而其存在原料药羔羊胃来源有限、蛋白水解谱窄、疗效缓慢、成本高等缺点，亟须寻找一种成本低、原料来源广泛及治疗效果更好的蛋白消化酶酶类药物。

本发明专利研究发现了一株高产凝乳酶的Bacillus subtilis YB-3菌株，其分泌的凝乳酶YS-1不仅对α-casein具有较强的蛋白水解活性外，对β-casein和κ-casein也有较强的蛋白水解活性，相比之下，动物源的凝乳酶对β-casein几乎无水解作用。因此该凝乳酶不仅水解谱宽而且生产成本低，很有可能成为复合凝乳酶胶囊中动物源凝乳酶的替代品。

发明内容

本发明公开一种凝乳酶YS-1，该凝乳酶YS-1是由枯草芽孢杆菌YB-3菌株(Bacillus subtilis YB-3)分泌而成，枯草芽孢杆菌YB-3菌株现已于2009年4月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号是CCTCC：M209075，该菌能分泌凝乳酶YS-1。

本方法公开一种凝乳酶YS-1的应用，该酶可用于治疗功能性消化不良。

本发明还提供凝乳酶YS-1的制备方法：

(1)将枯草芽孢杆菌YB-3菌株在摇瓶中培养，培养基为种子培养基；种子接种量为1.67％v/v、摇瓶装液量为6％v/v；种子培养基主要是由牛肉浸膏6.37g/L，酪蛋白11.07g/L，硫酸镁1.14g/L，氯化钠1.0g/L，磷酸氢二钠1.0g/L，酵母浸膏0.2g/L组成，pH7.0转速200rpm，温度为37℃、培养12h；

(2)将培养液离心去除菌体，取上清液，浓缩后得到浓缩液，备用；上清液的浓缩使用0.22μm和10kDa的中空纤维柱；

(3)对上述浓缩液进行乙醇分级沉淀，离心收集沉淀，复溶，干燥，研磨后得到凝乳酶YS-1；分级沉淀时选取20-60％乙醇浓度；干燥时采用40℃常压干燥。

实验结果显示，与市售复合凝乳酶胶囊相比，本发明公开的凝乳酶YS-1不仅对功能性消化不良具有相同的治疗效果，而且具有更低的生产成本，和更简单的制备流程，可用于制备治疗功能性消化不良的药物。

具体实施方式