[发明专利]一种分离氨基酸专用固相萃取剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种分离氨基酸专用固相萃取剂的制备方法，属于固相萃取剂领域。

背景技术

分子印迹技术是一种较新的分离分析技术，它模仿抗原-抗体的反应机理，具有特异性识别能力强、稳定性好、可重复使用等优点。因此，它在分离、传感及模拟抗体等领域都有很广泛的应用。近年来，分子印迹技术得到迅猛发展，其具有较好的物理和化学稳定性、成本低、易制备、且具有分子识别特性。因而被广泛应用于色谱、仿生传感器、固相萃取、模拟酶催化、药物控释、分析检测等领域。

在分离领域的实际操作中，分子印迹技术往往需要抽滤或离心，不易连续化，难以实现大规模快速生产。如果赋予印迹材料磁响应性，制成磁性微球，利用磁性载体快速分离技术，可简化工艺，实现连续化生产。目前具有磁响应性微球的制备和应用相关报导很多，但应用于氨基酸分离方面的报导不多，氨基酸的分离方法有膜分离、色谱法、毛细管电泳等。但能大规模工业化分离主要以离子交换法为主，该法的不足之处是分批操作、效率低、成本高、因此将分离载体赋予印迹高选择性和磁响应性二者并存，在提高分离选择性的同时可实现工业连续化生产，这将为氨基酸的生产提供一条新的技术路线。

发明内容

本发明主要解决的技术问题：针对传统的分子印迹聚合物一般采用小分子物质作为功能单体在模板氨基酸存在的条件下进行聚合而制备，然而在聚合过程中往往会导致氨基酸变性失活、发生相转变，使印迹位点发生变化，从而吸附效果差、效率低、成本高问题，提供了一种分离氨基酸专用固相萃取剂的制备方法，本发明以交联戊二醛后的磁性壳聚糖微球作为载体制备分子印迹聚合物，由于其分子链上带有大量的氨基，可以与氨基酸分子通过静电力、氢键等形成相互作用的结合位点，可以避免小分子作为功能单体时的聚合过程中变性失活，本发明采用固相萃取，具有富集倍数高、提取速度快、操作简单、溶剂用量少，将固相萃取和磁性相结合能将富集和分离合为一步，采用磁分离，处理技术简捷、高效。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

（1）称取10～15g木槿叶，粉碎后过200目标准筛，将过筛粉末装入500mL带有回流装置的圆底烧瓶中，再滴加40～50mL浓度为0.3mol/L盐酸溶液，移入水浴锅加热升温至80～90℃回流1～2h，趁热过滤得滤液；

（2）将上述得到的滤液放入旋转蒸发器旋蒸浓缩至其原体积的1/2，再加入浓缩液体积2～3倍无水乙醇，沉淀去除杂质后取上清液，将得到的上清液继续旋蒸浓缩直至析出晶体；

（3）用蒸馏水复溶上述析出的晶体并加入1～3g活性炭，用玻璃棒搅拌30～40min后过滤得滤液，向滤液中以2mL/min速率通入氯化氢气体20～30min，再将滤液放入4～6℃的冰水浴中，静置过夜析出氨基酸晶体，过滤后用无水乙醇反复冲洗3～5遍，放入烘箱在40～60℃下干燥40～50min，得混合氨基酸粉末，备用；

（4）量取100～200mL液体石蜡和其体积5%山梨醇酐单油酸酯，装入500mL烧杯中，再加入3～5g氧化铁粉末放入超声振荡仪中超声混合10～15min，得混合液；

（5）用注射器吸取60～80mL质量浓度为60%壳聚糖醋酸溶液，逐滴滴入上述混合液中，加入100～150mL戊二醛，放置在磁力搅拌机上搅拌交联反应20～30min，得磁性壳聚糖微球，用磁铁分离收集后真空干燥，密封保存；

（6）向500mL带有搅拌器、温度计和通气口的三口烧瓶中加入3～5g步骤（3）混合氨基酸粉末和50～80mL蒸馏水，启动搅拌器以100～200r/min转速搅拌溶解10～15min后，继续加入2～3g甲基丙烯酸和5～8g上述制得的磁性壳聚糖微球，继续搅拌20～30min，得混合液；

（7）向上述混合液中加入3～5g过硫酸氢钠后，经通气口以2mL/min速率向烧瓶中通入氮气10～15min，放入水浴锅中加热升温至55～60℃，保温静置聚合反应20～22h后放入布氏漏斗，以去离子水抽滤洗涤3～5次，干燥得聚合微球；

（8）将上述制得的聚合微球和其体积3～5倍的浓度为0.5mol/L冰醋酸混合后放入漩涡振荡仪中，在30～40W功率下漩涡振荡溶解聚合微球表面的氨基酸直至微球表面再无氨基酸检出，最后用去离子水洗涤至淋洗液pH至6～7，放入烘箱在105～110℃下干燥6～8h，即得分离氨基酸专用固相萃取剂。