[发明专利]一种木霉直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种的方法及制备的产品

说明书

技术领域

本发明属于菌种发酵领域，涉及一种木霉直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种的方法及制备的产品。

背景技术

木霉属真菌(Trichoderma spp.)被广泛用于防治土传枯萎病，被认为是最理想的生防菌，具有分布广泛、极易分离和培养、可抑制多种土传病原菌生长的作用，而且兼具有多种生防机制，包括重寄生作用、抗生作用、竞争作用和诱导抗性等等。尤其是哈慈木霉属在黄瓜、西瓜、香蕉、山药、茄子、棉花等多种作物上均表现出很好的防治土传枯萎病或黄萎病的作用。木霉菌株在根际定殖能够与尖孢镰刀菌形成竞争关系，以此抑制尖孢镰刀菌的生长、快速降解尖孢镰刀菌释放的毒素、乃至分解尖孢镰刀菌菌丝体进而以这些菌丝体为营养吞食尖孢镰刀菌，从而减少多种作物的土传枯萎病发病。大量研究结果表明哈茨木霉与一定的有机载体制成的生物有机肥施入土壤后作物土传枯萎病的防控效果可达80％以上。

但是，为什么木霉生物有机肥产业始终发展不起来？其主要原因是木霉固体菌种难以制备，或者说制备的木霉固体菌种孢子密度不够，很难用于生产达到行业标准的木霉生物有机肥产品的孢子密度(2×10⁷个/g)，因为要达到这个最终产品中的孢子浓度，必须生产出木霉孢子密度为10⁹个/g以上的木霉固体菌种，然后以3％-5％的固体菌种加入量加到腐熟的堆肥中去。而过去生产木霉固体菌种的基本技术路线是：固体材料先灭菌，调节固体材料湿度，然后接种木霉菌种，维持固体发酵空间的湿度和温度，进行固体发酵(繁殖)。工厂化生产中往往会出现很多问题难以实现木霉菌的高密度固体发酵目标，例如，大规模固体发酵的固体材料难以达到彻底的灭菌，即便是固体材料灭菌很彻底，而固体发酵过程中也难以控制空气中的杂菌进入固体材料，而杂菌的快速生长往往使接种的木霉菌种难以快速生长和繁殖至10⁹个孢子/g以上；其次，工厂化生产中如此大量的固体材料灭菌大大增加了企业生产成本，再加上固体发酵过程中严格控制发酵空间的空气净化程度成本，成为木霉固体发酵经济可行性的最大瓶颈；第三，由于还没找到能够迅速使木霉生长和繁殖的最佳营养配方，木霉在固体材料中的生长和繁殖速度较慢，很难成为优势种群而快速繁殖、抑制杂菌生长。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种木霉直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种的方法。

本发明的另一目的是提供该方法制备的产品。

本发明的又一目的是提供该产品的在制备有机肥中的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种木霉直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种的方法，包括向作物秸秆中加入氨基酸稀释液后调节起始pH为3.0-4.0，陈化后接种木霉液体菌种进行固体发酵获得木霉固体菌种；其中发酵室内温度为30±2℃，室内空气湿度65％±5％。

其中，所述的起始pH优选3.0-3.5。

所述的氨基酸稀释液由氨基酸水解液加水稀释所得；所述的氨基酸水解液优选通过以下方法制备而成：(1)在密闭容器中先将病死畜禽动物经自动化粉碎、所有固形物和液体自动转入密闭的水解罐后，在初始酸浓度c(1/2H₂SO₄)为3-5mol L^-1、80-100℃和1-2个大气压下水解2-5小时；(2)水解结束待水解罐内溶液冷却至80℃以下时，静置分层，收集中层的氨基酸溶液即为所述的氨基酸水解液。氨基酸水解液含氨基酸和各种肽类物质约10％(g/100ml)及以上。

作为本发明方法的一种优选，以氨基酸水解液为基准，氨基酸稀释液的加入量为每100g晒干后的秸秆加入10-20ml氨基酸水解液；进一步优选每100g晒干后的秸秆加入10ml氨基酸水解液。

如果加入氨基酸稀释液后pH不在3.0-4.0范围内需用碱或酸进行调节。

作为本发明的一种优选方式，所述的作物秸秆选自玉米秸秆，玉米秸秆晒干后含水量为约15％，含有机碳量为66％，当每100g晒干后的玉米秸秆加入10-20ml氨基酸水解液后能够使发酵材料的C/N比较合适，满足木霉生长的喜好。

作为本发明的一种优选方式，所述的玉米秸秆的细度为3-4mm，优选3mm。

本发明方法中，木霉液体菌种在秸秆中的接种量优选10％(ml/100g)。木霉液体菌种中木霉浓度为10⁸cfu/ml。所述的木霉液体菌种无需孢子液体，发酵的木霉新鲜液体即可。