[发明专利]一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物和试剂盒。

背景技术

心绞痛是由于冠状动脉粥样硬化狭窄导致冠状动脉供血不足产生，临床上使用舌 下含服硝酸甘油治疗，硝酸甘油通过释放一氧化氮(NO)，NO与内皮舒张因子相同，激活鸟苷 酸环化酶，使平滑肌和其他组织内的环鸟苷酸(CGMP)增多，导致肌球蛋白轻链去鳞酸化，调 节平滑肌收缩状态，引起血管扩张从而缓解心绞痛。一般舌下含服硝酸甘油15分钟内见效， 若不能缓解需及时入院治疗。实验发现乙醛脱氢酶2(aldehydedehydrogenase2，ALDH2) 是硝酸甘油起效的关键因素，硝酸甘油的代谢需要ALDH2基因编码的酶，ALDH2基因具有遗 传多态性，其中与亚洲人群最为密切的是ALDH2基因的c.1510位核苷酸存在G/A多态性。其 遗传变异型使硝酸甘油代谢速率大大降低，野生型的酶活性是变异型酶活性的10倍。从而 无法产生一氧化氮，难以发挥药效或药效降低。除此之外，ALDH2还是酒精代谢中的关键酶 之一，饮酒后，酒精分别通过乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)代谢成二氧化碳和水排 出体外。ALDH2基因突变型会使酒精代谢受阻，导致乙醛在体内的堆积。乙醛在人体血液的 积累，会造成对细胞膜脂质的过氧化，发生酒精中毒、酒精依赖、肝病、食管癌、咽喉癌等发 生率提高。

因此，ALDH2基因上的SNP位点G>A的基因多态性对治疗心绞痛影响重大，通过对 ALDH2基因上G>ASNP点基因型的检测来辅助临床诊断，为临床医生选择药物提供参考。同 时对过度饮酒嗜酒的人有一定的指导意义，以减少疾病的发生风险。

目前，检测基因位点多态性的技术手段有很多，但是大多数均停留在实验室水平， 还不能真正应用的医疗机构的日常检测中，以下介绍目前存在的检测技术：

(1)单链构象多态性技术(PCR-SSCP)

利用点突变或SNP可以对短的DNA单链构象造成影响，从而导致电泳速度的不同来 进行检测。特点是可以进行特定区域突变的筛查，但需要跑PAGE胶，较为繁琐，并有一定的 漏检率。

(2)高分辨率融解曲线分析(HRM)

这是近两年发展起来的新技术，原理简便，不需要对反应条件和体系进行特别的 优化，容易实现，可进行突变的筛查，但需要特定仪器和试剂的支持。并且只能对片段内突 变点进行检测，不能确定检测突变点的具体位置，容易造成假阳性结果。

(3)Taqman探针法(定量PCR)

适合已知SNP位点、位点数量少、通量高的检测。但是探针合成费用价格昂贵，不能 同时发现未知SNP位点，并且容易造成假阳性结果。

(4)变性高效液相色谱(DHPLC)

对于特定位点的突变检测，需要摸索各种条件，稳定性较差，影响因素太多，所以 不容易做好。

(5)限制性内切酶酶切法

根据突变或SNP位点选择合适的内切酶对PCR产物进行酶切，然后电泳鉴定。该方 法稳定可靠，但要注意酶切效率完全，而且不是所有的突变或SNP位点都有酶可以选择，容 易造成污染。

(6)芯片技术

与传统的仪器检测方法相比具有高通量、微型化、自动化、防污染等特点，仅适用 于全基因组SNP扫描，不适宜单个基因的SNP位点检测，精度低，价格昂贵。

目前国内上海百傲科技有限公司的ALDH2基因多态性检测试剂盒采用的是基因芯 片方法已获得认证。

(7)位点特异性PCR引物(ARMS)

利用PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增的原理，设计等 位基因特异性PCR扩增引物，在严格的条件下，只有在引物3’碱基与模板配对时才能出现 PCR扩增带，从而检测出突变。利用Taqman探针在实时荧光定量PCR平台上实现对样品DNA中 突变的检测，具有极高的特异性和敏感度。

(8)直接测序法

SNP分析的金标准，由于基因序列分析法检测的是易突变区的完整序列，因此可以 检测未知突变位点。但测序实验操作较为复杂、实验周期较长、电泳容易造成实验室污染。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种ALDH2基因c.1510位点多态性检 测的引物和试剂盒。