[发明专利]一种抗体酸性峰的纯化方法

说明书

本发明涉及一种抗体酸性峰的纯化方法，具体的，在2～8℃下，包含以下步骤：(1)使用MEP HyperCel填料，使用电导率由小变大的洗脱液洗脱，收集目标峰洗脱液，其中洗脱液中含有5～10mmol/L的苯丁酸钠；(2)将步骤(1)中的目标峰洗脱液进行弱阳离子层析，使用丁酸盐作为缓冲盐洗脱目标峰。通过上述方法进行纯化后，能加强对抗体酸性峰的去除，可有效的将酸性峰控制在11％‑14％范围内。

技术领域

本发明涉及抗体纯化领域，具体涉及一种抗体酸性峰纯化的方法。

背景技术

单克隆抗体在表达过程中，经过多种翻译修饰之后，会导致电荷异质性，体现在等电点不同，产生一系列不同等电点的抗体。经过高分辨率的离子交换柱分析，出现连续性的峰，而非单一的峰。电荷异质性影响到单克隆抗体的稳定性及生物学活性，因此在生产中，电荷异质性成为关键质量属性，需要严格控制。

由于电荷异质性差异非常小，很难通过一步层析就可以将抗体酸性峰降到可以接受的范围内。需要极高分辨率的离子交换填料，再配合其他的层析手段，比如亲和层析柱Protein A等。虽然Protein A层析效果对单克隆抗体的其他杂质如HCP、DNA、轻链等去除效果最佳，但对酸性峰的去除效果不如高分辨率的离子交换填料。配合高分辨率的离子交换填料GE公司的SP Sepharose High Performance，效果并不如意，且成本是非常昂贵的，GE公司的ProteinA通常需要十几万一升，使用寿命较短，另外，亲和填料含有蛋白A成分，使用后蛋白A会脱落引入新的杂质，需要建立检测蛋白A的方法和去除工艺。使用复合填料利用常规的去除方法，由于是满载上样，粒径较大，分辨率本身就不高，去除酸性峰的效果并不理想，给下游杂质的去除整加压力。

另外，使用其他填料的组合，如使用阳离子交换和阴离子交换，在常规方法去除抗体酸性峰的效果也不是很理想。目前，在控制抗体酸性峰的含量在医药纯化领域是一个普遍的难题。

发明内容

本发明根据上述技术背景的不足，本文选用pall公司的MEP填料和弱阳离子作为纯化手段，有效降低酸性峰的含量，减少后续纯化的压力。

具体的，本发明提供了一套可适于抗体酸性峰的纯化工艺，在2～8℃下，包含以下步骤：

(1)使用Pall公司的MEP HyperCel填料，使用电导率由小变大的洗脱液洗脱，收集目标峰洗脱液，其中洗脱液中含有5～10mmol/L的苯丁酸钠；

(2)将步骤(1)中所述目标峰洗脱液进行弱阳离子层析，使用丁酸盐作为缓冲盐洗脱目标峰。

在一些实施方案中，弱阳离子层析的填料为CM Sephadex C-25、TOYOPEARL CM-650(S)、Uni CM-30S。

在弱阳离子的层析过程中，进行洗脱时的缓冲液其丁酸盐的浓度常为150～250mmol/L。

在另一些实施方案中，纯化工艺包含以下步骤：

(1)使用Pall公司的MEP HyperCel填料，上样平衡后，先使用pH6.5的30mmol/L柠檬酸盐缓冲液洗脱，再使用pH7.0的50mmol/L柠檬酸盐缓冲液洗脱，收集目标峰洗脱液，其中柠檬酸盐缓冲液中均含有5～10mmol/L的苯丁酸钠；

(2)将步骤(1)中所述目标峰洗脱液进行弱阳离子层析，平衡后使用pH7.0的200mmol/L丁酸盐缓冲液洗脱目标峰。

在一些实施方案中，丁酸盐为丁酸钠、丁酸钙、吲哚丁酸钾。

本发明的一些实施方案中，抗体是TNFα抗体或其抗原结合部分，如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、Golimumab都是TNFα类抗体。

本发明有益效果在于：