[发明专利]一种阿达木单抗的阳离子交换色谱纯化方法

权利要求书

1.一种阿达木单抗的阳离子交换色谱纯化方法，包括对CHO细胞发酵表达的阿达木单抗发酵液进行阳离子交换色谱洗脱、疏水作用色谱洗脱，其特征在于，包括以下步骤：

1)将CHO细胞发酵表达后菌液分离；

2)将发酵液用水稀释，调节pH至6.00±0.10；

3)过阳离子交换柱，用pH 5.5-6.5、含有0.1-0.5mol/L尿素的缓冲液进行第一次洗脱，然后用pH 5.5-6.5、含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂的缓冲液进行第二次洗脱，收集洗脱组分；

4)将收集的组分通过疏水作用色谱洗脱，所述的疏水作用色谱洗脱分为2步洗脱，其中，第一步洗脱的洗脱液为pH5.5-6.5、0.15-0.4mol/L(NH₄)₂SO₄的PBS缓冲液，第二步洗脱的洗脱液为pH5.5-6.5的PBS缓冲液，收集洗脱组分。

其中，步骤3)所述的甜菜碱类表面活性剂选自十二烷基二羟乙基甜菜碱、十八烷基二羟乙基甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的分离为将发酵液进行4000-8000g离心，然后对上清液进行6000-8000g离心。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述的发酵液用水稀释是稀释至电导率7.0±0.20mS/cm，调节pH是用柠檬酸溶液调节至6.00±0.10。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)调节pH前，将发酵液进行过滤，取上清液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的第一次洗脱的洗脱液为pH 6.0的含0.2mol/L尿素的20mmol/L PBS缓冲液。

6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的第二次洗脱的洗脱液为20-60mmol/L柠檬酸盐缓冲液；步骤3)所述的第二次洗脱的洗脱液中含有150-200mmol/L氯化钠。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的第二次洗脱的洗脱液为45mmol/L柠檬酸盐缓冲液；步骤3)所述的第二次洗脱的洗脱液中含有180mmol/L氯化钠、1％质量份的甜菜碱类表面活性剂和2％体积份的乙醇。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的柠檬酸盐缓冲液为柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的柠檬酸盐缓冲液为柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。