[发明专利]一种针对前列腺特异抗原的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗原检测技术领域，进一步涉及基于ELISA的抗原检测技术，具体涉及一种针对前列腺特异抗原的检测方法。

背景技术

近年来，随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变以及环境污染的加剧等，前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势。前列腺癌已超过皮肤癌成为北美男性最常见的癌症，在因癌致死因素中排第二位。前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)是从前列腺组织中分离、纯化的一种特异性糖蛋白，具有丝氨酸蛋白酶活性。PSA是目前公认的最有价值的前列腺癌标志物，它是临床应用中特异性高、敏感性强的诊断前列腺癌不可缺少的首选TM检测方法，对前列腺癌的诊断、疗效观察及预后监测具有十分重要的意义和作用。血清前列腺特异抗原(PSA)正常值一般<4ng/mL，当前列腺癌发生时PSA>10ng/mL，具有辅助临床诊断的显著意义。

早期检测PSA的方法主要有免疫扩散、免疫电泳、火箭电泳等，但因灵敏度低、操作复杂等都已被淘汰。近年来，一系列检测PSA的方法被确立，其中多克隆抗体放射免疫法存在灵敏度低、重复性差、线性范围窄、费时耗力等缺点，不便于应用；酶联免疫吸附法受基质特异性影响，测定结果存在假阴性或假阳性的情况，且灵敏度低；自动微粒酶联免疫法测定要有专门的仪器才能完成，操作繁琐，仪器贵重，该检测方法的应用依然受到限制；化学发光法依赖于高纯度试剂和高精度仪器，样品前处理过程繁琐，因此也不适于广泛高灵敏快速检测。聚合酶链式反应法测定时干扰因素影响较大，方法学本身存在缺陷，测定结果可信度不够，灵敏度不足。然而，酶联免疫吸附法(ELISA)方法因具有快速、灵敏、特异、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯度要求不高，特别适用于大批量样品的检测等优点，已成为PSA快速筛查检测的主要方法。现有技术中针对PSA的ELISA检测方法普遍基于辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原催化双氧水生成羟自由基，进而氧化无色的化学显色底物四甲基联苯二胺(TMB)形成蓝色产物，然后使用终止液(2M H₂SO4)终止反应形成黄色溶液于450nm处记录吸光度值。该类方法因其显色强度较低，因此检测灵敏度相对较低，当待测样品中目标物含量较低时易出现假阴性结果，从而无法满足实际应用的要求。

因此，近年来，一些新型信号传导机制替代传统ELISA信号传导机制用于提高传统ELISA灵敏度的方法被广泛报道，如共振酶联免疫法、化学发光酶联免疫法、荧光染料酶联免疫法、荧光增强酶联免疫法以及荧光淬灭酶联免疫法等。其中，基于荧光底物的ELISA因其具有较高的灵敏度而受到了广泛的关注。据报道，用荧光底物替代传统显色底物可以将检测灵敏度提高至少1-2个数量级，然而发光体系的有效性不仅由底物所决定，还同检测对象、标记物酶、检测工艺等具有密切关系，因此在ELISA方法中引入新的发光体现需要结合具体情况进行全新设计。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种针对前列腺特异抗原的检测方法，以解决现有技术的前列腺特异抗原ELISA检测方法精度较低。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术用于前列腺特异抗原检测的ELISA方法中，标记抗体的酶灵敏性较低。

本发明要解决的再一技术问题是现有技术用于前列腺特异抗原检测的ELISA方法中，显色系统灵敏性较低。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶对前列腺特异抗原执行ELISA检测时，具体工艺方法并不明确。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶、采用双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点作为底物对前列腺特异抗原执行ELISA检测时，检测结果与抗原浓度的线性关系不佳。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶、采用双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点作为底物对前列腺特异抗原执行ELISA检测时，过程中洗涤效果不佳。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种针对前列腺特异抗原的检测方法，该方法属于双抗夹心酶联免疫法，该方法是针对前列腺特异抗原的检测，该方法中用于标记抗体的酶是触酶C100。

作为优选，该方法中底物包括双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点。其中双氧水作为碲化镉量子点荧光淬灭剂，反应过程中，双氧水在触酶作用下分解，从而降低荧光淬灭作用，实现发光。

作为优选，该方法包括以下步骤：

1)包被前列腺特异抗原抗体；