[发明专利]一种针对黄曲霉毒素B1的检测方法

权利要求书

1.一种针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，该方法属于直接竞争酶联免疫法，该方法是针对黄曲霉毒素B₁抗原的检测，该方法中用于标记抗原的酶是触酶C100，该方法中底物包括双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点。

2.根据权利要求1所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)包被抗黄曲霉毒素B₁单克隆抗体，而后加入待测样品；

2)而后加入触酶C100标记的黄曲霉毒素B₁，混合后于35～39℃避光环境中反应40～80min，洗涤；

3)而后加入浓度为8～12μmol/L的双氧水溶液混合，于35～39℃避光环境中反应20～40min；

4)而后加入巯基丙酸修饰的碲化镉量子点混合，于室温避光环境中反应10～20min；

5)检测步骤4)产物的荧光强度。

3.根据权利要求2所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于步骤1)中所述包被抗黄曲霉毒素B₁单克隆抗体具体包括以下操作：

A)取蛋白G，在酶标板上以0.04～0.06mol/L、pH9.4～9.8的碳酸盐缓冲液作为包被液，稀释蛋白G至18～22μg/mL；

B)去除酶标板上的液体后利用洗涤液洗涤酶标板，而后取抗黄曲霉毒素B₁单克隆抗体，利用所述包被液在酶标孔内稀释抗黄曲霉毒素B₁单克隆抗体至0.6～1μg/mL；

C)去除酶标板上的液体后利用洗涤液洗涤酶标板，再加入牛血清白蛋白封闭液，于35～39℃封闭1～3h，而后弃去封闭液。

4.根据权利要求3所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于步骤A)中稀释后，于0～8℃条件下静置8～12h，再执行步骤B)；步骤B)中稀释后，于35～39℃条件下静置1～3h，再执行步骤C)。

5.根据权利要求2所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于步骤2)所述触酶C100标记的黄曲霉毒素B₁是通过以下方法制备的：

M)配制黄曲霉毒素B₁肟化物浓度为0.8～1.2mg/mL的四氢呋喃溶液，加入N-羟基丁二酰亚胺至浓度为1.8～2.2mg/mL，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐至浓度为3.6～4.4mg/mL，而后于避光条件下反应40～80min；

N)而后固液分离，取上清挥发溶剂，取残留物溶解于二甲基甲酰胺中，即得到活化产物；

P)将步骤N)所述活化产物与含触酶C100浓度为3.5～4.5mg/mL的碳酸氢钠溶液混合，于避光条件下反应8～12h；

Q)而后透析去除游离的黄曲霉毒素B₁肟化物，即得到所述触酶C100标记的黄曲霉毒素B₁。

6.根据权利要求5所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于步骤N)中所述固液分离是10000r/min离心15min。

7.根据权利要求2所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于步骤4)所述巯基丙酸修饰的碲化镉量子点是通过以下方法制备的：配制含有8～12mmol/L硝酸镉、20～28mmol/L巯基丙酸、3～7mmol/L碲氢化纳的溶液即为前体溶液，所述前体溶液的pH为11～11.5，将所述前体溶液水浴加热至93～97℃，即得到所述巯基丙酸修饰的碲化镉量子点。

8.根据权利要求2所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于步骤5)中荧光强度的检测是利用酶标仪实现的，激发波长为310nm，发射波长为590nm。

9.根据权利要求2～8任一项所述的针对黄曲霉毒素B₁的检测方法，其特征在于所述洗涤是利用洗涤液冲洗或浸泡，所述洗涤液是含有0.3～0.7％(v/v)吐温-20的PBST溶液，所述PBST溶液的浓度为0.005～0.02mol/L，所述PBST溶液的pH为7.0～7.5。