[发明专利]一种百蕊草组培瓶苗的育苗方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种百蕊草组培瓶苗的育苗方法。

背景技术

百蕊草( Thesium Chinense Turcz ) 为檀香科植物，全草入药，具清热解毒、补肾涩精作用，治急性乳腺炎、肺炎、肺脓肠、扁桃体炎、上呼吸道感染、肾虚腰痛、头晕遗精、滑精，为目前急缺的广谱抗菌中草药。百蕊草中百蕊草素含量较高，且容易分离提取，所以是较好的百蕊草素生产原材料。百蕊草为半寄生植物，离开寄主植物不能独立生存，近年来，随着寄主植物的逐渐减少，百蕊草产量逐年减少，因此收购价格不断上涨，现有的野生资源已难以满足市场的需求。

研究表明，组织培养生产的百蕊草和野生百蕊草具有相同的药效，使用组培苗完全可以替代野生苗。所以规模化生产组培苗是解决资源匮乏的有效途径。虽然利用组织培养技术进行快速繁殖方面的研究，如：袁艺（激光生物学报，2002年）等人通过对百蕊草组织培养的培养基种类、激素配比、添加物汁液、碳源的研究，得出适合百蕊草侧芽分化生长的最佳培养基为MS + 6-BA2. 0mg / L + NAA0. 5mg / L+ 狗牙根汁液。诱导愈伤组织以2,4-D 浓度在0. 5mg / L-2mg / L 之间最佳。碳源以蔗糖，浓度3%最佳。生根实验表明：较低浓度的生长素不利于生根，最佳生根培养基为MS + 6-BA0. 5mg/ L+ NAA2m g/ L+ 狗牙根汁液或MS + 6- BA0.5mg / L+ IBA 2mg / L + 狗牙根汁液；江芹等人得出丛生芽的诱导最佳培养基为MS + 6-BA 1.5mgL+NAA 0.01 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L。最适继代培养基以MS + 6-BA(0.5—1.0 mg/L) + NAA 0.0l mg/L，组织培养程序无需添加其他寄主植物的提取液，60 ml/kg的生根水诱导试管苗生根效果最好。

但还存在移栽成活率低下的问题，并且人工栽培组培苗和实生苗都存在需要寄主植物寄生，百蕊草产量低（每年亩产约5-7公斤），只能广种薄收，与粮争地的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有增殖速度快，生产周期短，不受季节限制，连续生产等优势，不占用耕地，能实现规模化生产的百蕊草组培瓶苗的育苗方法。

本发明的一种百蕊草组培瓶苗的育苗方法，包括以下步骤：

（1）外植体的获得

取春季野生百蕊草植株幼嫩健壮枝条在自来水下冲洗干净，作表面消毒后，在无菌条件下将叶片表面划伤，剪成长度约为1cm小段；

（2）愈伤组织的诱导及继代培养

将剪切好的叶片接种于诱导愈伤组织培养基上，在温度为24±1℃、光照培养条件为1500-2000Lx 的条件下培养诱导，叶片周围迅速膨胀，诱导出愈伤组织，诱导率可达100%，所诱导的愈伤组织绝大多数为质地疏松的淡黄色或淡绿色愈伤组织；3 周后将诱导出的具有稳定形态特征和生长速率的愈伤组织转到新鲜培养基上继代培养，每2周继代一次；

(3)无根苗诱导及快速繁殖

继代培养所获愈伤组织经光培养分化增殖至30d时，用MS固体培养基于温度23-25℃、光照时间12-16h/d、光照强度2000-3000Lx诱导培养15-20d后，可在愈伤组织表层或稍深层形成并分化出百蕊草无根苗；将诱导出的无根苗切成单苗，接种于增殖培养基于温度23-25℃、光照时间12-16h/d、光照强度2000-3000Lx进行增殖培养，经26天培养增殖系数为8.5；

(4)壮苗培养

快繁获得的百蕊草无根苗较纤细，需经壮苗培养基作壮苗培养，培养温度为23-25℃、光照时间为12-16h/d、光照强度为2000-3000Lx；壮苗培养15天后，叶片增厚、增宽，茎干增粗，幼苗健壮，色泽正常，洗去附着茎基部附着培养基，摊凉3天即可作为原料提取百蕊草素。

上述的一种百蕊草组培瓶苗的育苗方法，其中：所述的诱导愈伤组织培养基的组成为：在常规的MS 培养基中加入30g/L 的蔗糖，0.7% 的琼脂，2mg/L 的谷氨酰胺，0.05-0.15mg/L 的NAA，0.1-0.3mg/L的2,4-D，0.5-2.0mg/L的6-BA，10mg/L的AgNO3，pH 调为5.8-6.2；

上述的一种百蕊草组培瓶苗的育苗方法，其中：所述MS固体培养基由0.5-1.5mg/L的NAA,0.5-1.5mg/L的6-BA。