[发明专利]表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌及构建方法及应用

权利要求书

1.表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷大肠杆菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：

1)用NotI和XhoI双酶切质粒pTrcHisB-ARO10-HpaBC，得到带有Trc启动子的基因片段Trc-ARO10-HpaBC，将Trc-ARO10-HpaBC和NotI和XhoI双酶切的pET28a-UGT^FS连接并转化至E.coli DH5α，得到质粒pET28a-UGT^FS-Trc-ARO10-HpaBC；所述pTrcHisB-ARO10-HpaBC来自于中国专利201510242626.8；

2)以SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示序列为上、下游引物，以大肠杆菌BL21(DE3)基因组DNA为模板PCR扩增T7聚合酶基因片段，将T7聚合酶基因片段用EcoRI和PstI双酶切并连接入经过EcoRI和PstI双酶切的表达载体pBb0，得到载体pBb0-T7；

3)以SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示序列为上、下游引物，以pBb0-T7为模板，PCR扩增获得带有lacUV5启动子的T7聚合酶基因，将XhoI酶切的带有lacUV5启动子的T7聚合酶基因片段和步骤1)获得的质粒连接并转化至E.coli DH5α，得到质粒pET28a-UGT^FS-ARO10-HpaBC-lacUV5T7；

4)将步骤3)所获得的质粒pET28a-UGT^FS-ARO10-HpaBC-lacUV5T7和质粒pBb3共同转入大肠杆菌BMGA，得到一种表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌，命名为BMGHG；所述一种表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌含有并能够表达ARO10、HpaBC和UGT基因；所述UGT基因为UGT73B6基因或UGT73B6^FS基因。

2.权利要求1所述方法构建的表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌。

3.权利要求2的表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌发酵制备羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征是所述羟基酪醇葡萄糖苷为羟基酪醇-3-O-β-D-葡萄糖苷和/或羟基酪醇-4-O-β-D-葡萄糖苷。