[发明专利]一种结直肠癌相关的标志物、其引物及应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程及肿瘤学领域，具体涉及一种结直肠癌相关的标志物、其引物及应用。

背景技术

结直肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，全球范围内每年新发病例数约100万/年，死亡人数约50万。随着生活水平的提高，饮食习惯的改变，我国结直肠癌发病率逐年提高，居恶性肿瘤发病率第4位。近25年来，结直肠癌已成为我国发病率增长最快的恶性肿瘤，每年大约有14万新患病例，占全部癌症患者的6.8％。据预测，我国结直肠癌的发病率与死亡率在今后很长一段时期内将稳步上升，成为我国最常见、发病率上升最快的恶性肿瘤之一。尽管手术、化疗、放疗等综合治疗手段不断改进，仍有25%左右的结直肠癌出现复发和转移。因此，对结直肠癌的早期诊断是降低结直肠癌发病率和死亡率的有效手段。目前临床常用的肿瘤标志物如CEA、CA19-9等特异性不高，急需寻找更为有效的结直肠癌筛查标记物。

microRNA（miRNA）为小的非编码RNA，长度为19-24bp。在人类，miRNA主要通过特异性识别靶mRNA的3′-UTR并与之结合，从而作用于靶mRNA的翻译，进而调节其蛋白表达。miRNA几乎在所有的细胞生物学进程中发挥重要的调控作用，包括个体发育、细胞增殖、分化、代谢、凋亡和应激等。约1/3的人类蛋白编码基因受miRNA的调控。miRNA失衡表达可促进多种人类疾病尤其是肿瘤的发生发展。约50%的已知人类miRNA基因定位于与肿瘤相关的染色体区域，如miR-181参与B细胞的分化；miR-223参与粒细胞的分化；miR-17-92促进细胞的增殖。肿瘤组织普遍具有特征性的miRNA表达，即肿瘤细胞miRNA表达水平常与同一组织中的正常细胞存在显著的差异，而且不同的肿瘤类型表达也有区别，用miRNA的表达来区分肿瘤的类型比蛋白编码的mRNA更准确。因此特征性的miRNA表达作为有效的工具用于肿瘤的诊断、预后和治疗的反应性等显示了良好的临床应用前景。虽然肿瘤组织miRNA表达谱往往与癌症预后更为相关，但无法应用于临床早期诊断。由于miRNA的小分子特性及易于释放入血，血清miRNA能够作为癌症或其他疾病的分子标记物，提供非损伤性的早期诊断癌症的手段。肺癌糖尿病患者均存在疾病特异性血清miRNA表达谱。血清miR-141的表达可以作为前列腺癌早期诊断的标志物。

近年来研究表明，结直肠癌的发生发展可能与miRNA的异常表达密切相关。但结论并不统一，因此在临床研究中依然需要寻找高效特异的结直肠癌筛查标记物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种结直肠癌相关的血浆miRNA标志物、其引物、其用途及一种结直肠癌检测试剂盒。

本发明采用的技术方案是，一种结直肠癌相关的血浆miRNA标志物，该标志物为miRNA-218，其序列为SEQIDNo.5：5’-UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU-3’。

所述血浆miRNA标志物的一种引物，该引物为SEQIDNo.1：5’-GGTTGTGCTTGATCTAACCATGTG-3’和No.2：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTA-3’。

一种miRNA-218的新用途，其作为结直肠癌相关的血浆miRNA标志物。

本发明同时提供所述的血浆miRNA标志物在制备结直肠癌检测试剂盒中的应用；所述的血浆miRNA标志物的引物在制备结直肠癌检测试剂盒中的应用。

一种结直肠癌检测试剂盒，用于检测血浆中miRNA-218。

进一步的，其包含所述的引物。

进一步的，试剂盒还包括内参miRNA，所述内参miRNA为人工合成的RNAControl，其序列为SEQIDNo.3：5’-AAAUCACCGGGUGUAAAUCAGCUUG-3’。

进一步的，试剂盒包括反转录引物，其序列为SEQIDNo.4：5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’，其中V=A、G、或C，N=A、G、C、或T。

进一步的，试剂盒的全部组成成分为：

（1）血清总RNA提取试剂；

（2）miRNA加尾试剂；

（3）cDNA合成试剂；

（4）实时定量荧光PCR试剂；