[发明专利]一种从大兴安岭野生蓝莓中酶解提取高纯度白藜芦醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于从天然植物中提取白藜芦醇的技术领域，具体涉及从天然植物蓝莓中制备高纯度白藜芦 醇的方法。

背景技术

白藜芦醇是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，化学名为3，4’，5-三羟基二苯乙烯，白色或 淡黄色结晶粉末。白藜芦醇既能预防肿瘤癌症疾病，又能预防心脑血管疾病，具有保肝、抗氧化、调节血 脂平衡、延缓衰老等保健作用，是对人类健康有显著积极功效的活性物质，因此其在医药保健方面应用非 常广泛。由于白藜芦醇是芪类物质的多酚类化合物，具有酚类和烯类性质，在与空气曝露或者光照条件下， 白藜芦醇会被氧化或发生异构转变生成不可逆物质，生理活性遭破坏损失，因此为了提高白藜芦醇收率和 延长存放时间，白藜芦醇的生产和保存过程要求比较严格。白藜芦醇普遍存在于蓝莓、花生、桑葚、葡萄 科等天然植物体内并且主要是以相对稳定的白藜芦醇苷分子形式存在。特别是蓝莓中的白藜芦醇苷和白藜 芦醇总含量比其他天然植物高，工业化生产潜在效益巨大.因此，从蓝莓中提取白藜芦醇是当今研究的重 点。

现有从蓝莓中提取白藜芦醇的方法，如2013年4月17日公布的公布号为CN103044210A的“一种从 蓝莓中制备高纯度白藜芦醇的生产工艺”专利，公开的方法是：以蓝莓为原料，经酶解晾干、连续逆流提 取罐丙酮回流提取、过滤浓缩、乙酸乙酯萃取、浓缩、硅胶层析，浓缩结晶制得白藜芦醇晶体成品。该方 法的主要缺点是：①恒温酶解反应时间较长，长时间高温不利于白藜芦醇的化学结构稳定性；②由于白藜 芦醇在暴露光照条件下易失活而使含量降低，因此酶解后晾晒操作也不利于白藜芦醇的化学结构稳定性； ③由于丙酮沸点较低，易挥发，具有一定毒性，与空气混合易发生爆炸危险，因此，其作为逆流提取溶剂 时，相应设备的保温和密封相对要求较高；④采用乙酸乙酯-石油醚作为分离洗脱溶剂，其中石油醚毒性 较大而且易燃，溶剂回收过程涉及较大安全隐患。

本发明的目的是针对现有从蓝莓中提取白藜芦醇方法的不足，提供一种从大兴安岭野生蓝莓中酶解提 取高纯度白藜芦醇的方法，具有酶解充分且时间短，生产设备简单，操作成本低，运行安全性高，绿色环 保，易于推广工业化生产等特点。

本发明的主要原理是：蓝莓中自藜芦醇主要以白藜芦醇苷形式的存在，其分子式为C20H22O8，化学名 为3，4′，5-三羟基二苯乙烯-3-β-D-葡萄糖苷，它在热水溶中具有良好的溶解度，易溶于甲醇、乙醇等 有机溶剂。在合适pH值一定温度且搅拌条件下，白藜芦醇苷逐步从蓝莓中溶出，同时溶液中的酶作用于 白藜芦醇苷的β-D糖苷键，使其水解生成白藜芦醇(C14H12O3)和葡萄糖。另外，酶也可破坏蓝莓植物细胞 壁，有利于白藜芦醇苷的溶出和转化。

发明内容

实现本发明目的的技术方案是：一种从大兴安岭野生蓝莓中酶解提取高纯度白藜芦醇的方法，以大兴 安岭采摘的蓝莓果实为原料，经生物酶解反应、水提醇沉深度提取和分离浓缩、干燥的简化工艺而制得白 藜芦醇晶体粉末产品。所述方法的具体步骤如下：

(1)生物酶解反应

先将大兴安岭采摘的蓝莓果实原料放置于粉碎机中进行粉碎，经180～220目的筛进行分筛，收集过 筛的蓝莓汁，备用，未过筛的颗粒再返回粉碎机中进行粉碎。按蓝莓粉末的质量(g)∶纤维素酶的质量 (mg)∶三水醋酸钠缓冲溶液的体积(mL)之比为1∶(1～10)∶(10～50)的比例，先用高浓度盐酸或氢氧化钠 溶液调节所述缓冲溶液的pH值为4.5-6.2后，将蓝莓粉末和调节pH值后的缓冲溶液，依次放置于间歇式 反应器中，在35～55℃恒温和95～180r/min的转速下，搅拌15～20min后，再加入纤维素酶，继续恒温 搅拌，进行酶解反应4～8h，就制得酶解反应后的固液混合物。

(2)水提醇深度提取

将制得的生物酶解反应后的固液混合物，经板框压滤机进行压滤，收集滤液及固体残渣；将固体残渣 放置于提取罐中，加入60％～70％的甲醇溶液进行提取，其体积比为1g∶(10～20)mL，提取温度为35～ 60℃、搅拌速度为95～180r/min；提取25～60min后，过滤，收集过滤液和残渣；残渣反复提取两次，收 集过滤液，合并几次过滤液经减压浓缩，收集浓缩液，回收甲醇；得白藜芦醇粗品液；

(3)制备高纯度白藜芦醇晶体粉末产品

①大孔树脂的初步分离与洗脱