[发明专利]表达鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的重组酵母菌株及其所表达的蛋白和用途

权利要求书

1.一种制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒蛋白的方法，其特征在于通过以下方法得到：

将表达鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的重组酵母菌株接种于BMGY培养基中，30℃，300 rpm摇瓶培养，培养菌密度至OD₆₀₀为4时离心，用BMMY培养基重新悬浮酵母细胞，继续摇瓶培养，每12小时补加无水甲醇至0.5%（v/v）浓度，BMMY培养基诱导120小时后，离心收集菌体，提取蛋白，即得；

其中，所述的表达鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的重组酵母菌株，含有7个拷贝的经优化后的鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因序列，所述的经优化后的鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的重组酵母菌株是通过以下方法构建得到的：

（1）获得经优化后的鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因序列，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，命名为optiVP2基因；

（2）将optiVP2基因和酵母载体连接，将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，通过碱裂解法提取重组质粒，限制性内切酶切下完整的optiVP2基因表达盒，同时酶切已经得到的含有optiVP2基因的重组质粒，进行连接反应，将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，重复6次构建得到含有7个表达盒的表达质粒，命名为pAO815optiVP2*7；

（3）将重组酵母载体pAO815optiVP2*7线性化，转化酵母感受态细胞，获得基因组中整合了7个optiVP2表达盒的重组酵母。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的酵母载体为pAO815，所述的酵母感受态细胞为SMD1168酵母感受态细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的pAO815optiVP2*7是通过以下方法构建得到的：

（1）将optiVP2基因和酵母载体pAO815分别用EcoRⅠ酶切，用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收，载体用CIAP去磷酸化，optiVP2基因片段及载体用T₄ DNA连接酶进行连接反应；将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，通过碱裂解法提取重组质粒；

（2）用BglⅡ和BamHⅠ切下完整的optiVP2基因表达盒，用BamHⅠ单酶切已经得到的含有optiVP2基因的重组质粒，用CIAP去磷酸化，optiVP2基因表达盒及载体通过T₄ DNA连接酶进行连接反应，将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞；

（3）重复步骤（2）6次构建得到含有7个表达盒的表达质粒，命名为pAO815optiVP2*7。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的表达鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的重组酵母菌株命名为SMD1168/IBDVNP7-44，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号是：CGMCC NO.12175。