[发明专利]Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高频XIX型突变筛查引物及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种Citrin缺陷病致病基因SLC25A13 高频XIX型突变筛查引物及试剂盒。

背景技术

Citrin蛋白是由SLC25A13基因编码的一种位于线粒体内膜上的钙调节载 体蛋白，主要在肝脏中表达。SLC25A13基因突变导致其所编码的citrin蛋白功 能不足或丧失，引发一系列生化代谢紊乱，并最终形成临床表型及预后各不相 同的以肝脏损害为突出临床表现的常染色体隐性遗传病-Citrin缺陷病(Citrin Deficiency，CD)。CD主要临床表型可分为三种，分别为Citrin缺陷导致的新 生儿肝内胆汁淤积症(NeonatalIntrahepaticCholestasiscausedbyCitrin Deficiency，NICCD，OMIM#605814)、成人发病瓜氨酸血症II型(Adult-onset CitrullinemiaTypeII，CTLN2，OMIM#603471)和Citrin缺陷导致的生长发育 落后和血脂异常(FailuretoThriveandDyslipidemiacausedbyCitrinDeficiency， FTTDCD)。NICCD主要发病于新生儿或小婴儿，以圆胖脸、肝大、黄疸及肝 功能异常为主要表现，若早期干预治疗大部分预后良好；CTLN2主要发病于11 岁以上的儿童或是成人，以高氨血症导致的神经精神症状为突出临床表现，往 往预后不良，需要肝脏移植；FTTDCD是不同于NICCD及CTLN2的一种新 的临床表现型，它主要表现为生长发育落后和血脂异常。

Citrin缺陷病的临床表现复杂多样，至今尚未建立成熟的临床和生化诊断标 准，SLC25A13基因突变分析被认为是诊断该病的必要手段。在已发现的 SLC25A13基因突变类型中，I型(851del4)，III型(1638-1660dup)，X型 (c.615+5G>A)和XIX型(IVS16ins3kb)这四种突变类型为我国人群的高频突 变类型。其中XIX型突变为大片段插入突变，传统的检测方法主要是在插入位 点两侧设计引物，进行长片段PCR，然后电泳，如无XIX型突变则只扩增出一 条短带，而XIX型纯合子则扩增出一条长带，长度是正常短带长度加上插入片 段长度，而杂合子标本(一条染色体携带突变，而另外一条正常)则扩增出一 条短带和一条长带。这种方法需要使用LA-PCR技术，PCR运行时间长达7个 小时以上，且对操作者的要求较高，检测实践中经常出现假阴性而导致误判漏 诊。另外，有文献报道使用套式PCR检测XIX突变，两条上游引物设计在插入 位点前正常序列，两条下游引物设计在插入序列内，两次扩增后电泳如果有目 的条带则说明包含XIX型突变。这一种方法不能区别纯合子与杂合子，且套式 PCR非常容易出现污染，导致假阳性结果。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种Citrin 缺陷病致病基因SLC25A13高频XIX型突变筛查引物。本发明提供了全新设计 的三条引物，建立了依靠普通Taq酶的多重PCR体系，可以通过一次PCR和分 析电泳图谱即可鉴定出样本是XIX突变阴性、阳性还是杂合子，准确、简单、 快速且费用低。

本发明的另一目的在于提供Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高频XIX型 突变筛查试剂盒。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高频XIX型突变筛查引物，所述的筛查引 物为：

MuXIX-2UF：5'-gccaaaccacttacagcggagt-3'；

MuXIX-2UR：5'-ttatgacagagagcagcactggttc-3'；

MuXIX-1R：5'-tccctacgacaacagagcattagc-3'；

正常基因扩增片段长度为335bp，突变后扩增片段长度为564bp。

一种Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高频XIX型突变筛查试剂盒，包括 上述三条引物(MuXIX-2UF、MuXIX-2UR和MuXIX-1R)、dNTPs、DNA聚合 酶、DNA聚合酶缓冲液组件。