[发明专利]一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及透明质酸钠的制备方法，尤其涉及从透明质酸发酵液中分离提取透明 质酸钠的方法。

背景技术

目前大都采用发酵法来生产透明质酸，由于发酵液中含有菌体、蛋白质以及核酸 等物质，从发酵液中提取透明质酸的方法各种各样，但是不外乎是用氯化十六烷基吡啶 （CPC）分级分离工艺或者乙醇直接进行沉淀，这不但涉及到粗品复溶过程费时费力，增加生 产成本，而且得到透明质酸纯度低和蛋白质等杂质含量高，不利于大规模生产。

由于透明质酸是大分子多糖，具有很大的分子量和较强的粘性，因此当将透明质 酸添加到化妆品或食品中时，化妆品或食品的粘度会大幅上涨，影响产品的外观状态、口感 及使用。专利CN201310021430将含有透明质酸的发酵液升温除菌后过滤除菌体，滤液稀释 后加入活性炭进行吸附，用树脂脱色除蛋白，然后加入乙醇进行沉淀，该专利中采用升温的 方法进行预处理，既容易使透明质酸活性降低，而且预处理后的发酵液粘度大，透明质酸分 子量高，需要稀释后过滤，这样用乙醇沉淀过程中增加了乙醇的使用量，造成了工业有机溶 剂的浪费，而且采用树脂脱色除蛋白，前处理麻烦、脱蛋白效果差。专利CN201080041200提 供了一种用将高分子透明质酸和活性炭在一定分解条件下进行反应，减少透明质酸分子量 的方法，本专利直接在透明质酸发酵液中加入活性炭，由于透明质酸发酵液中含有大量的 蛋白质、核酸和小分子物质，容易使活性炭中微孔堵塞，降低活性炭调节分子量的能力，需 要较长时间的处理才可以得到需要分子量的透明质酸。

发明内容

为克服以上问题本发明提供了一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法, 不仅可以使发酵液中透明质酸和蛋白质等杂质很好的分离,而且可以调节透明质酸钠的分 子量,使其更广泛的应用于化妆品和食品领域。本发明为解决上述问题提出的技术方案：

一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法，其特征在于，采用如下步骤：

(1)将透明质酸发酵液升温至45-55℃,加入氢氧化钠溶液使发酵液中碱浓度为0.5- 1M，搅拌并保温1.5-2.5小时；

（2）调节温度至15-20℃，加入透明质酸发酵液体积15-25%的聚醚L44(聚氧乙烯、聚氧 丙烯嵌段聚合物)搅拌均匀，静置10-14小时，分相，制得聚醚上相溶液和含有透明质酸的下 相溶液；

(3)维持温度15-20℃，在下相溶液中加入盐酸调PH至5.5-6.0，加入下相溶液质量3%- 10%的100目活性炭，搅拌2-3小时，过滤;

(4)调节温度至35-50℃，加入滤出液质量2%-8%的300目活性炭搅拌吸附3-5小时，过 滤;

(5)降至室温后，加入乙醇至酒精度为50%-65%沉淀透明质酸钠，洗涤固化干燥得粉末 状透明质酸钠。

所述的步骤（1）透明质酸发酵液中透明质酸的含量为10-12%，加入氢氧化钠溶液 浓度为2-4M。

所述的步骤(2)加入的聚醚L44分子量为2200。步骤（2）制得的聚醚上相溶液在温 度50-54℃静置1.5-2.5小时回收聚合物。所述步骤(2)加入透明质酸发酵液体积20%的聚醚 L44，搅拌时间为15-30min，静置分相时间为12h。

所述步骤(4)中加入300目活性炭为滤出液质量的5-7%。

温敏性聚合物聚醚L44(聚氧乙烯、聚氧丙烯嵌段聚合物)是具有较低临界溶解温 度的聚合物。当聚合物的水溶液温度高于最低临界溶解温度时，聚合物的疏水性会增强，溶 液会变浑浊，形成一个由聚合物富集相与水相组成的两项体系。因此在双水相萃取中利用 这一特点通过简单的温度引导相分离，将目标产物从聚合物富集相中分离出来并且达到聚 合物回收再利用的目的。另外该类聚合物还具有两亲性，因此由该聚合物组成的双水相体 系对于亲水性与疏水性的物质都可以进行分离。在一定的温度与浓度下，该聚合物水溶液 能发生自组装而形成胶束。这样的结构能够将疏水性物质包覆在核内，从而增强疏水性物 质的溶解性。另外，该聚合物还具有价格低，毒性低与良好的生物相容性等优点。

有益效果

1.本发明在发酵液中加入氢氧化钠溶液进行处理，降低了透明质酸的分子量和发酵液 粘度，既可以和温敏性聚合物聚醚L44形成双水相萃取体系，又可以为后续反应引入钠离 子,生成透明质酸钠,使其容易在一定浓度的乙醇溶液中生成沉淀。