[发明专利]肉鸭细小病毒灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种肉鸭细小病毒灭活疫苗，主要涉及疫苗领域。

背景技术

2014年11月以来，我国部分地区肉鸭流行一种以临床症状为鸭喙发育不良，舌头 外露、肿胀、向下弯曲，发病率为10-30％，如无细菌、病毒继发感染，则死亡率一般低于3％。 鸭发病表现为2个阶段，第一阶段为7～13日龄，症状为站立不稳，蹼外翻，强行驱赶时跛行 或翻滚；第二阶段为21～28日龄，在第一阶段基础上，病鸭主要表现为运动障碍，跟不上大 群，呈蹲坐式或侧卧，表现出喙短、舌头外露症状。患病鸭料肉比正常鸭高30％以上，同日龄 出栏体重比正常鸭低20％以上，且发育不整齐，屠宰时易翅膀和腿骨折。禽病专家刁有祥等 最先分离到病原，基因序列鉴定与鹅细小病毒同源性大于98％，与番鸭细小病毒同源性为 77％左右，命名为鸭细小病毒。

该病无疫苗用于预防，常规的抗病毒和抗菌治疗方法基本无效，即使用肉鸭细小 病毒特异性抗体进行治疗，虽然效果较好，但鸭子患病期间料肉比高，且会发生部分死亡， 相应地提高了养殖成本等，屠宰后有喙短舌头外露的肉鸭酮体价格比正常鸭低10％，对鸭 养殖业造成巨大经济损失。

发明内容

针对以上现有技术的不足，本发明提出一种预防肉鸭细小病毒的肉鸭细小病毒灭 活疫苗。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：肉鸭细小病毒灭活疫苗，包括种毒、抗原 制备、抗原的鉴定、灭活疫苗制备和疫苗检验，其特征在于，制备抗原之后，进行抗鸭细小病 毒特异性血清制备，对抗原进行无菌和病毒含量检测，无菌检验合格、病毒含量大于等于 10^-6.0ELD₅₀/0.1ml的抗原用终浓度为0.2％甲醛于室温灭活24小时，期间振摇3次，每次3分 钟，进行无菌和灭活检验合格，按油相：水相1:1乳化，制成油乳剂灭活疫苗并检验合格，按 如下免疫程序免疫健康鸭20只，用于制备抗鸭细小病毒特异性血清。

首免：腿部肌肉注射油乳剂灭活疫苗0.5ml。

二免：颈部皮下注射油乳剂灭活疫苗1.0ml。

三免：胸部肌肉分点注射油乳剂灭活疫苗1.5ml。

三免结束后21日，宰杀鸭子，收集血液，于4℃、12000rpm离心，分离血清，加入终浓 度为0.1％甲醛于室温灭活24小时，期间振摇3次，每次3分钟，加入过滤除菌，进行无菌合 格，检测鸭细小病毒琼扩抗体效价为1:32，结果同时也说明抗原的免疫原性良好。

进一步，灭活疫苗的制备为灭活抗原加入鸭白细胞介素2，使鸭白细胞介素2终浓 度为5μg/ml，灭活前的鸭细小病毒含量大于等于10^-6.⁵⁰ELD₅₀/0.1ml，分装，2-8℃保存，即为 肉鸭细小病毒白细胞介素2佐剂灭活疫苗。

本发明的技术效果如下：制备的肉鸭细小病毒白细胞介素2佐剂灭活疫苗于2015 年10月-2015年12月在山东聊城、菏泽等地的8个、曾经发生过该病的肉鸭养殖场进行了临 床预防试验，共计34000羽樱桃谷肉鸭在2日龄进行了免疫，0.5ml/只，至全部鸭出栏，平均 预防保护率96.45％，零星发生肉鸭细小病毒的鸭子按常规治疗方法效果较佳，基本无喙变 短、舌头外露症状出现。

结果说明该疫苗的临床预防效果良好，零星发病的鸭子未能保护可能与接种疫苗 过程中针头刺穿皮肤，导致部分疫苗外流，接种剂量不足。或是本身鸭子为弱雏，机体免疫 反应较差，疫苗接种后保护性抗体产生较低，不足以抵抗野毒感染有关。即使鸭子发生细小 病毒病，由于有部分抗体存在，在采取常规治疗方法时效果也较好，比这些养殖场未免疫过 肉鸭细小病毒白细胞介素2佐剂灭活疫苗以前发病后的治疗效果要好。

具体实施方式

实施例

第一步种毒

从感染鸭细小病毒的病鸭肝脏中分离、鉴定，经易感鸭胚传代12代获得。

第二步抗原制备

将肉鸭细小病毒种毒用生理盐水20000倍稀释，经尿囊腔接种11日龄易感鸭胚， 0.1ml/胚，收集接种60～120小时死亡鸭胚尿囊液，无菌检验合格，即为抗原，于-40℃保存。 同时取样进行无菌和病毒含量检测。

第三步抗鸭细小病毒特异性血清制备