[发明专利]一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法

权利要求书

1.一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，包括以下步骤：

A、收集裸鼹鼠皮层混合神经细胞：

分离65-70天的胚胎裸鼹鼠大脑皮层组织，将大脑皮层组织剪碎，加入组织消化液混匀之后，于35-37℃消化15-30分钟；然后用混合神经细胞培养基终止消化，离心去除上清之后，在混合神经细胞培养基中将沉淀重悬并吹打成单细胞悬液；将单细胞悬液种于无菌且预先包被有基质层的培养板中；

B、裸鼹鼠大脑皮层混合神经细胞的培养：

将步骤A得到的混合神经细胞，用混合神经细胞培养基培养于三气培养箱中培养6-10个小时，待其完全贴壁之后，更换为神经元纯化培养基继续培养2-4天，然后将培养基更换为神经元维持培养基继续培养2-4天，如此为一个循环，培养2-4个循环；

所述的混合神经细胞培养基为含有体积百分数为10％胎牛血清的低糖DMEM；

所述的神经元纯化培养基为含有10μM 5-氟尿嘧啶的Nerobasal培养基并添加体积分数为2％的B27；

所述的神经元维持培养基为含有体积百分数为2％B27的Neurobasal培养基，同时添加100ng/ml NGF；

所述的三气培养箱的参数设置为：温度控制在35±2℃，氧浓度为5％，二氧化碳浓度为5±1％，湿度为96±2％。

2.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，其特征在于，步骤A中，所述的组织消化液为含有质量浓度0.25％的胰酶和终浓度为0.08mg/ml DNA酶的混合液。

3.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，其特征在于，步骤A中，所述的基质层为laminin聚合物。

4.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，其特征在于，步骤A中，用显微剪将海马组织剪碎至1mm³，加入组织消化液混匀之后，于37℃消化20min。

5.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，其特征在于，步骤B中，用混合神经细胞培养基培养于三气培养箱中培养8小时，待其完全贴壁之后，更换为神经元纯化培养基继续培养2天，然后将培养基更换为神经元维持培养基继续培养2天，如此为一个循环，培养2个循环。

6.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，其特征在于，所述三气培养箱的参数设置为：温度控制在35℃，氧浓度为5％，二氧化碳浓度为5％，湿度为96％。